1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus2，PCV2)是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)等相關(guān)疾病的主要病原。PMWS發(fā)病豬多為斷奶仔豬和育肥豬，表現(xiàn)為精神沉郁、呼吸急促、厭食、黃疸、貧血、進(jìn)行性消瘦或生長遲緩等。隨著國際貿(mào)易交流的廣泛開展，PCV2在全球呈現(xiàn)出流行趨勢，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的影響，也給社會帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，一種快速、準(zhǔn)確的診斷方法對疾病的防控顯得十分重要。本研究制備了PCV2單克隆抗體，建立了捕獲EL

2、ISA抗體檢測方法，并與間接ELISA方法進(jìn)行了臨床應(yīng)用比較研究。
　　 PCV2單克隆抗體的制備:PCV2的ORF2基因編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白(Cap)，也是區(qū)分PCV1與PCV2的重要區(qū)域，其編碼蛋白(Cap)具有良好的免疫原性。本實(shí)驗(yàn)以Cap蛋白為抗原免疫6-8周齡的雌性Balb/C小鼠，將免疫脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合，用間接ELISA方法篩選與亞克隆后共得到5株可穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為2D3

3、、3E10、1C5、3H11、4F9。將雜交瘤細(xì)胞對Balb/C小鼠進(jìn)行腹腔注射，收集腹水并用間接ELISA方法檢測腹水的抗體效價滴度，分別為1∶51200、1∶51200、1∶25600、1∶25600、1∶25600，并用辛酸-飽和硫酸銨方法進(jìn)行純化。用Western Blot檢測2D3、3E10兩株單抗，結(jié)果顯示兩株單抗均可以與Cap蛋白發(fā)生特異性結(jié)合。
　　 PCV2捕獲ELISA方法的建立:將純化得到的高純度單克隆抗體

4、包被在96孔酶標(biāo)板上，0.5％ BSA封閉后加入Cap蛋白，Cap蛋白與包被的抗體發(fā)生特異性反應(yīng)也結(jié)合在酶標(biāo)板上，用于檢測血清中的PCV2抗體。優(yōu)化反應(yīng)條件，包被抗體的最佳稀釋度為1∶3200，與之結(jié)合的Cap蛋白最佳稀釋度為1∶2000，即濃度為3.52μg/mL，被檢血清最佳稀釋度為1∶40，鼠抗豬酶標(biāo)二抗最佳稀釋度為1∶1600。建立的捕獲ELISA方法的臨界值為0.2，即血清樣品OD630nm值大于0.2時，判為陽性;血清樣品O

5、D630nm值小于0.2時，判為陰性。并對建立的捕獲ELISA方法進(jìn)行敏感性、特異性和重復(fù)性研究，確定建立的捕獲ELISA抗體檢測方法具有良好的敏感性、特異性和重復(fù)性。
　　 PCV2捕獲ELISA檢測方法的臨床應(yīng)用:本實(shí)驗(yàn)用建立的捕獲ELISA方法與武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒同時檢測了近20個不同地區(qū)（公司）的1928份血清樣品。捕獲ELISA方法的陽性檢出率為62.97％(1

6、214/1928)，間接ELISA方法的陽性檢出率為72.67％(1401/1928)，用兩種方法檢測的結(jié)果相一致的有1589(1164陽性、425陰性)份，符合率為82.42％。通過特異性試驗(yàn)比較分析，建立的捕獲ELISA方法比間接ELISA方法具有更好的特異性。
　　 結(jié)果表明，本研究建立的捕獲ELISA抗體檢測方法能有效檢測PCV2抗體，為進(jìn)一步開發(fā)豬圓環(huán)病毒2型捕獲ELISA抗體檢測試劑盒奠定了基礎(chǔ)，也為斷奶仔豬多系統(tǒng)衰