1、近年來(lái)，根腐病成為制約我國(guó)草莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。本論文針對(duì)草莓根腐病病原不清，檢測(cè)技術(shù)缺乏等問(wèn)題，開(kāi)展了草莓根腐病病原鑒定和分子檢測(cè)技術(shù)的研究。
　　 ⑴明確了北京地區(qū)草莓根腐病優(yōu)勢(shì)菌群為鐮刀菌(Fusarium spp.)和腐霉菌(Pythium spp.)。2011年4月到2012年3月，在北京周邊昌平、順義、廊坊等草莓種植基地通過(guò)田間病樣采集、病原菌分離，共得到105個(gè)菌株。經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察，初步認(rèn)定為6個(gè)屬，它們是鐮刀菌屬

2、(Fusariumspp.)、腐霉菌屬(Pythium spp.)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)、疫霉屬(Phytophthora spp.)、擬盤(pán)多毛孢屬(Pestalotiopsis clavispora)、核盤(pán)菌(Sclerotinia sclerotiorum)。其中鐮刀菌屬和腐霉菌分別占分離總株數(shù)的64.76％和17.14％，出現(xiàn)頻率最高，為北京周邊地區(qū)草莓根腐病病原菌中的優(yōu)勢(shì)菌群。
　　 ⑵明確

3、引起北京周邊地區(qū)草莓根腐病的病原菌為尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)和終極腐霉菌(Pythium ultimum)。用傷根接種法，對(duì)分離得到菌株進(jìn)行致病性測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只有鐮刀菌屬和腐霉菌屬菌株在草莓植株上有不同程度的致病力。通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)合真菌核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer，ITS)序列的同源性比對(duì)，確定草莓根腐病病原菌為尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum

4、)和終極腐霉菌(Pythium ultimum)。
　　 ⑶建立了尖孢鐮刀菌熒光定量PCR檢測(cè)體系。利用特異性引物FOF1/FOR1和草莓尖孢鐮刀菌菌株CM11032435，構(gòu)建攜帶目的片段的重組標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒-F，通過(guò)質(zhì)粒梯度稀釋法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)檢測(cè)體系優(yōu)化，應(yīng)用于草莓根際土壤和植株中尖孢鐮刀菌的檢測(cè)，該體系靈敏度達(dá)到0.145fg/μL，人工模擬帶菌土的最小檢測(cè)值為0.37fg/μL，即10個(gè)孢子/g土壤能夠被檢測(cè)出來(lái)；人工接

5、種后對(duì)植株進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，接種7-9天后，尖孢鐮刀菌菌在草莓植株體內(nèi)累積量最多；田間土樣和植株的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，除了未發(fā)病田塊，其他土樣和植株病樣均被定量檢測(cè)到有效的病原菌量。
　　 ⑷建立了終極腐霉菌熒光定量PCR檢測(cè)體系。利用特異性引物ULT1F/ULT4R和草莓終極腐霉菌菌株CM11031012，構(gòu)建攜帶目的片段的重組標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒-Z，通過(guò)質(zhì)粒梯度稀釋法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)檢測(cè)體系優(yōu)化，應(yīng)用于草莓根際土壤和植株中終極腐霉菌的檢測(cè)，該體系

6、靈敏度達(dá)到0.18fg/μL，人工模擬帶菌土壤的最低檢測(cè)數(shù)值為1.79fg/μL，可以檢測(cè)到100個(gè)孢子/g土壤；人工接種后對(duì)植株進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，接種3-5d時(shí)，終極腐霉檢測(cè)量最大；田間土樣和植株檢測(cè)中，僅有重病田和死苗植株被檢測(cè)到發(fā)病閾值范圍內(nèi)的病原菌量。
　　 ⑸明確了北京周邊地區(qū)引起草莓根腐病的病原菌主要類(lèi)型，并首次應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)快速定量檢測(cè)土壤和植株中的草莓根腐病病原菌，有助于明確病害的侵染來(lái)源，對(duì)病害的的田間病情