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文檔簡介
1、對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒病被國際獸疫局(OIE)列為“須向OIE申報的甲殼動物重要疾病”之一[1]。該病毒對凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)有較強的致病性,死亡率高達90%,嚴重將導致慢性矮小殘缺綜合癥(runt-deformitysyndrome,RDS),對紅額角對蝦(Penaeusstylirostris)的致病性和致死率均較高[2]。
本研究對廈門地區(qū)發(fā)病對蝦檢疫中分離得到對蝦IHHNV
2、,對IHHNV病毒的主要相關(guān)研究如下:
1、IHHNV衣殼蛋白基因在大腸桿菌中的表達及抗體制備
根據(jù)GenBank(NC-002190)IHHNV的全基因組序列,設(shè)計出主要結(jié)構(gòu)蛋白基因Ⅳ的相應引物,從廈門發(fā)病的對蝦中,提取DNA,以此為模板,利用聚合酶鏈式反應(PCR)擴增目的基因。再將目的基因分別與表達載體pGEX-6p(l)和pET-28a連接,構(gòu)建重組表達載體(命名為pGEX-Ⅳ、pET-Ⅳ),大腸桿菌
3、BL21中IPTG誘導表達,SDS-PAGE檢測,大小約為62kD和41kD。將pET-Ⅳ表達重組蛋白經(jīng)純化,免疫小鼠。Western免疫印跡反應結(jié)果表明其抗體均可與pGEX-Ⅳ和pET-Ⅳ表達的蛋白發(fā)生特異性反應。
2、IHHNV衣殼蛋白基因在畢赤酵母中的表達及抗體制備
將該病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白基因克隆至畢赤酵母穿梭表達質(zhì)粒pPIC9K,構(gòu)建重組表達載體(命名為pPIC9K-Ⅳ),酶切線性化后采用電穿孔法轉(zhuǎn)化到
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