西瓜噬酸菌IV型菌毛相關(guān)基因pilO與pilQ的功能分析.pdf_第1頁(yè)
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1、瓜類細(xì)菌性果斑病是發(fā)生在葫蘆科植物上的一種病害,其病原為噬酸菌屬西瓜種(Acidovorax citrulli),自報(bào)道以來(lái)已在美國(guó)、澳大利亞、巴西、中國(guó)等眾多國(guó)家發(fā)生,給當(dāng)?shù)氐墓项愖魑锓N植業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。因此,要從根本上防治瓜類細(xì)菌性果斑病,我們應(yīng)弄清其致病機(jī)制。
   2009年,Bahar證明西瓜噬酸菌中存在Ⅳ型菌毛,同時(shí)也是其重要的毒力因子。Ⅳ型菌毛是由菌毛蛋白組成可彎曲的絲狀物,長(zhǎng)度約為5-8nm,革蘭氏陰性及陽(yáng)性

2、菌中均有發(fā)現(xiàn)。它普遍存在于細(xì)胞的一極或兩極,并調(diào)節(jié)細(xì)菌表面運(yùn)動(dòng):顫動(dòng),還與細(xì)菌活性、表面粘附、集群、生物膜形成、遺傳物質(zhì)攝取和毒力相關(guān)。Ⅳ型菌毛的合成蛋白與Ⅱ型分泌系統(tǒng)蛋白具有較高的同源性,包括菌毛蛋白pilA、pilE、假菌毛蛋白、菌毛前體處理前導(dǎo)肽酶pilD、ATP酶pilM、多層跨膜蛋白和外膜分泌素pilQ等,pilM/N/O/P蛋白也都參與Ⅳ型菌毛的合成。
   本試驗(yàn)對(duì)西瓜噬酸菌(A.citrulli)中部分Ⅳ型菌毛相

3、關(guān)基因構(gòu)建插入突變體,用浸種測(cè)定法測(cè)定出pilO及pilQ兩株突變體致病力明顯減弱,并對(duì)這兩株突變體的相關(guān)表型進(jìn)行測(cè)定。在透射電子顯微鏡下觀測(cè)發(fā)現(xiàn):野生型及pilO突變體仍然能夠形成Ⅳ型菌毛,而pilQ突變體喪失形成Ⅳ型菌毛的能力;光學(xué)顯微鏡下觀測(cè)野生型、突變體及互補(bǔ)菌株的顫動(dòng)能力發(fā)現(xiàn):pilO及pilQ突變體與野生型相比,完全喪失顫動(dòng)能力;同時(shí)pilO及pilQ突變體游動(dòng)能力、生物膜形成能力和致病力也明顯減弱?;パa(bǔ)菌株中,顫動(dòng)能力得到

4、恢復(fù),游動(dòng)能力以及生物膜形成能力部分恢復(fù),致病力與突變體相比也有所增強(qiáng)。在MMX基本培養(yǎng)基中測(cè)定野生型與突變體的生長(zhǎng)曲線發(fā)現(xiàn):突變體菌株生長(zhǎng)能力無(wú)明顯改變,同時(shí)突變體也能激發(fā)非寄主植物煙草的過(guò)敏性反應(yīng)。pilO突變體仍然能夠形成Ⅳ型菌毛但完全喪失顫動(dòng)能力,由此表明,pilO基因并不直接參與西瓜噬酸菌Ⅳ型菌毛的合成,而是其Ⅳ型菌毛的功能基因;pilQ突變體同時(shí)喪失形成Ⅳ型菌毛以及顫動(dòng)性的能力,表明pilQ基因在西瓜噬酸菌中直接參與Ⅳ型菌毛

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