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文檔簡介
1、巫山淫羊藿是我國傳統(tǒng)的藥用植物,收載于2010年版《中國藥典》,已有2000多年的用藥歷史。研究表明巫山淫羊藿有明顯的生理活性和藥理作用,具有很大的開發(fā)價值。目前,對巫山淫羊藿組織快繁的研究報道較少。利用生物技術手段繁育巫山淫羊藿,可以在較短的時間內獲得大量的種苗,對于保護巫山淫羊藿野生資源、保證藥源,實現(xiàn)其可持續(xù)利用都有十分重要的意義。本文通過研究巫山淫羊藿不同外植體消毒方法、愈傷組織誘導與分化、叢生芽誘導與增殖、試管苗生根等方面,探
2、討了巫山淫羊藿組培快繁的技術方法。主要研究結果如下:
(1)外植體選擇與表面滅菌:巫山淫羊藿葉片、總葉柄頂端、芽和種胚為初代啟動培養(yǎng)的最佳外植體。外植體最佳消毒方法為75%酒精消毒30 s,再用0.1% HgCl2消毒,分別為葉和總葉柄頂端消毒各6 min,芽連續(xù)兩次消毒(4+2) min,污染率可控制在5%以內,存活率在75%以上。種子接種前用0.1% HgCl2消毒2 min,存活率為50%。
(2)愈傷
3、組織誘導:愈傷組織誘導中,2,4-D和IBA達到了極顯著水平;各種外植體誘導效果依次為總葉柄頂端、葉片、種胚,但葉和總葉柄頂端誘導的愈傷組織不易分化且后期發(fā)生褐化;葉誘導愈傷組織時WPM培養(yǎng)基比MS、B5、N6更適宜愈傷組織誘導和生長,降低褐化率;種胚誘導愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2,4-D2mg·L-1+IBA2 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1;葉誘導愈傷組織最佳培養(yǎng)基為WPM+2,4-D2mg·L-1+6-BA0.5 m
4、g·L-1,誘導率為79.2%。
(3)愈傷組織分化:在愈傷組織分化中,6-BA和NAA達到了極顯著水平;種胚愈傷組織易分化出芽,而葉和總葉柄頂端誘導的愈傷組織沒有分化出芽。種胚愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)為MS+6-BA1 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+IBA1 mg·L-1,分化率為73.3%。
(4)叢生芽誘導與增殖:以巫山淫羊藿的種胚和芽為外植體進行離體培養(yǎng),均可直接誘導出芽。芽誘導最佳培養(yǎng)基為
5、WPM+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1,誘導率為75.5%,誘導芽過程WPM培養(yǎng)基和6-BA達到極顯著水平;種胚誘導芽時6-BA起到了決定作用,且誘導率與生長素和細胞分裂素的比值有密切關系,種胚誘導芽最適培養(yǎng)基為MS+IBA2 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1,誘導率為77.8%。細胞分裂素濃度對叢生芽增殖起決定作用,叢生芽增殖的適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg·L-1
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