豬葡萄球菌多重PCR檢測(cè)方法的建立與ZLT-1株的蛋白全譜分析.pdf_第1頁(yè)
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1、豬葡萄球菌是一種環(huán)境常見菌,也是仔豬滲出性皮炎的主要病原。本研究根據(jù)GenBank已發(fā)表的豬葡萄球菌的6種脫落毒素基因序列,設(shè)計(jì)合成了6對(duì)特異性引物,通過(guò)特異性、敏感性和重復(fù)性試驗(yàn)建立了可行的豬葡萄球菌及脫落毒素的多重 PCR檢測(cè)方法。對(duì)臨床分離到的9株豬葡萄球菌的檢測(cè)結(jié)果顯示,均擴(kuò)增出了與預(yù)期大小相符的23SrDNA(662bp)條帶;同時(shí),其中6株擴(kuò)增出了ExhA(316bp,2株)、ExhC(525bp,2株)和ShetA(814

2、bp,2株)基因特異性條帶;另外3株均未擴(kuò)增出任何毒素基因條帶,鑒定為無(wú)毒力型菌株,以上結(jié)果與生化鑒定、單重 PCR和測(cè)序結(jié)果相符。此多重 PCR方法不僅操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)快速,而且具有高度特異性、敏感性和良好的重復(fù)性,可用于仔豬滲出性皮炎的診斷和豬葡萄球菌的快速鑒定。
  為了深入地研究豬葡萄球菌的代謝、生長(zhǎng)特性及對(duì)宿主的作用。本研究運(yùn)用上述多重PCR檢測(cè)方法對(duì)48株葡萄球菌進(jìn)行篩選,結(jié)合臨床背景,經(jīng)動(dòng)物回歸試驗(yàn)最終篩選出了一株具有

3、較強(qiáng)致病力的豬葡萄球菌ZLT-1株,對(duì)ZLT-1株的菌體和培養(yǎng)物上清蛋白進(jìn)行抽提,樣品檢測(cè)合格后經(jīng)膠內(nèi)酶解、液相色譜分離,最終進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn)行蛋白質(zhì)全譜分析,通過(guò)GO、COG和通路分析對(duì)其結(jié)果進(jìn)行詮釋。結(jié)果表明,豬葡萄球菌菌體鑒定出919種蛋白,上清中鑒定出111種蛋白,大多數(shù)蛋白均參與了細(xì)胞生物過(guò)程、新陳代謝、黏附和催化過(guò)程;葡萄球菌常見33種致病因子中只有脫落毒素、乙酰轉(zhuǎn)移酶、烯醇酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶;通路分析發(fā)現(xiàn)了11種蛋白,

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