1、本試驗(yàn)主要研究枸杞多糖(LBP)、槲皮素(Que)對雙酚A(BPA)致成年小鼠睪丸損傷的緩解作用。通過稱量計(jì)算臟器系數(shù)；光鏡檢測睪丸病理學(xué)改變；試劑盒檢測抗氧化能力；酶聯(lián)免疫法檢測血清中各種生殖激素水平的變化等方法,探討枸杞多糖、槲皮素保護(hù)睪丸的生精功能及可能的作用機(jī)制,尋找環(huán)境雌激素誘導(dǎo)雄性動物生殖損傷的緩解措施。試驗(yàn)分三個(gè)部分:一、BPA對成年小鼠睪丸的損傷作用及機(jī)理研究。
　　 研究不同劑量的BPA對雄性小鼠生殖系統(tǒng)的損傷

2、作用。將25g左右的雄性小鼠40只,隨機(jī)分成對照組、BPA10、20、50、100mg／kg:染毒組,每組10只,連續(xù)7d對小鼠腹腔注射BPA,對照組注射等量的橄欖油,1次／d,染毒結(jié)束24h后摘取并稱量大鼠睪丸、附睪質(zhì)量并計(jì)算臟器系數(shù)；光鏡檢測睪丸病理學(xué)改變；酶聯(lián)免疫法檢測血中睪酮(T)、黃體生成素(LH)水平。結(jié)果表明與對照組相比,小鼠睪丸重量、附睪重量及其臟器系數(shù)顯著降低(P<0.05,P<0.01)；不同劑量BPA組,尤其是高劑

3、量BPA組的曲細(xì)精管部分支持細(xì)胞與生精細(xì)胞分離,生精細(xì)胞松散,無規(guī)律,各層細(xì)胞排列紊亂；隨染毒劑量的增加,小鼠血清中T和LH的含量顯著降低(P<0.05),20、50、100 mg／kg是三個(gè)劑量組T和LH的濃度與對照組相比差異極顯著(P<0.01),因此BPA適合作為研究雌激素對成年雄性小鼠睪丸損傷的模型。
　　 二、LBP對BPA所致睪丸損傷的緩解作用。
　　 本試驗(yàn)旨在研究LBP對BPA誘導(dǎo)的成年小鼠睪丸損傷的保

4、護(hù)作用。將成年雄性小鼠隨機(jī)分為5組,除對照組A組外,其余4組的小鼠分別腹腔注射20mg／kg的BPA,連續(xù)7 d,A組小鼠注射等量橄欖油；同時(shí)C、D、E組的小鼠分別灌服50、100、200mg／kg的LBP,A組和B組小鼠灌服等量的生理鹽水,連續(xù)7 d。處理結(jié)束24h后計(jì)算睪丸、附睪重量及臟器系數(shù)；檢測睪丸病理學(xué)改變；檢測血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的含量；檢測血清中睪酮(T)、黃

5、體生成素(LH)和促性腺激素釋放激素(GnRH)的水平。結(jié)果表明,與BPA模型組比較,LBP各組睪丸質(zhì)量、睪丸系數(shù)、附睪質(zhì)量和附睪系數(shù)及其組織學(xué)變化均有改善趨勢,其中補(bǔ)充100和200 mg／kg LBP的小鼠變化顯著?？寡趸Y(jié)果顯示,LBP各劑量組血清中的SOD、GSH-Px活性均高于BPA組,差異極顯著,其中100mg／kg LBP組抗氧化酶的活性最高,MDA含量隨LBP的增加而降低。補(bǔ)充LBP后,血清中T、LH和GnRH的含量均顯

6、著增加。結(jié)果提示,LBP對BPA導(dǎo)致的小鼠生殖損傷具有顯著緩解作用。
　　 三、Que對BPA所致睪丸損傷的緩解作用。
　　 Que對BPA致小鼠睪丸損傷的保護(hù)作用,并探討其最佳劑量。方法:50只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為5組,A組(n=10)正常喂飼,B、C、D、E組(各10只)小鼠均腹腔注射50mg／kg的BPA,1次／d,構(gòu)建小鼠睪丸損傷模型,同時(shí)C、D、E組分別用100、200、400mg／kg濃度的槲皮素灌胃7天,

7、A組和B組給予等量生理鹽水。記錄小鼠的一般狀況、體征及體重變化和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)睪丸、附睪的重量；試劑盒檢測血清中SOD、GSH-Px和MDA的含量；酶聯(lián)免疫法測定T、LH和GnRH的水平；對睪丸組織進(jìn)行組織學(xué)觀察。結(jié)果:200mg／kg槲皮素組小鼠體重、各臟器質(zhì)量均較B組有明顯改善(P<0.05或P<0.01),接近A組,C組和E組只有附睪重量變化顯著(P<0.05)；Que各劑量組血清中的SOD、GSH-Px活性均高于BPA組,差異極顯著

8、(P<0.01),其中D組抗氧化酶的活性最高,MDA結(jié)果顯示,D組明顯降低,差異極顯著(P<0.01),E組也有所降低,差異顯著(P<0.05)；C、D、E組小鼠血清生殖激素水平均有一定程度的恢復(fù),但D組各生殖激素指標(biāo)均接近A組；組織學(xué)觀察見各給藥組睪丸生精小管生精細(xì)胞層數(shù)、精子數(shù)目均高于B組,尤以D組200mg／kg恢復(fù)最為明顯。結(jié)論:Que能夠促進(jìn)BPA致小鼠睪丸生精功能障礙后生精功能的恢復(fù)。
　　 總之,本試驗(yàn)通過BPA構(gòu)