1、剛第弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種世界范圍內(nèi)廣泛流行的專性細(xì)胞內(nèi)寄生的人畜共患寄生蟲病。首次發(fā)現(xiàn)在1908年,因其速殖子呈弓形而得名。貓科動(dòng)物是其已知的唯一中間宿主,所有的溫血?jiǎng)游锒伎梢宰鳛槠渲虚g宿主。弓形蟲在人類上主要發(fā)生在免疫抑制人群中(HIV患者和器官移植患者等),成年人無癥狀,孕婦會(huì)引起流產(chǎn)或產(chǎn)智障兒,在兒童中主要是引起弓形蟲眼病和弓形蟲腦病。目前全球范圍內(nèi)對(duì)水產(chǎn)品弓形蟲感染的研究十分少,而我國這樣的一個(gè)水產(chǎn)

2、品的大國,至今仍然沒有相關(guān)的研究。
　　 為了建立一種簡便、快速、準(zhǔn)確的水產(chǎn)品弓形蟲檢測方法,來檢測中國東南沿海水產(chǎn)品的弓形蟲的感染情況,本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)弓形蟲國際標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株RH株和CN豬株的核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS-1序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增、克隆、測序和序列分析,以期找到一種合適的遺傳標(biāo)記建立一種能夠用于水產(chǎn)品檢測的PCR方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CN株和RH株的ITS-1序列完全一致,且與GenBank上注冊(cè)RH株的ITS-1序列也完全一

3、致。從而驗(yàn)證了可以用弓形蟲ITS-1序列作為遺傳標(biāo)記而建立弓形蟲特異性PCR檢測方法的可行性。隨后本研究以弓形蟲ITS-1序列為種特異性遺傳標(biāo)記,通過對(duì)PCR各組分以及PCR程序的逐一摸索建立了特異的弓形蟲PCR檢測方法。采用有限稀釋法稀釋弓形蟲速殖子DNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增,檢測該方法的敏感性。用同一引物擴(kuò)增牡蠣、雞、蝦、魚、大腸桿菌、雞球蟲、蝦皮下及造血組織壞死桿狀病毒和弓形蟲速殖子基因組DNA,檢測PCR方法的特異性。該P(yáng)CR方法最低

4、可以檢測500fg弓形蟲速殖子DNA(相當(dāng)于5個(gè)速殖子的DNA)。牡蠣、雞、蝦、魚、大腸桿菌、雞球蟲、蝦造血與組織壞死病毒基因組DNA均未擴(kuò)增出條帶,僅弓形蟲基因組DNA出現(xiàn)特異性條帶。從而表明該方法具有很好的特異性和敏感性,適用于弓形蟲的檢測。
　　 隨后本研究采用已經(jīng)建立的PCR檢測方法對(duì)中國部分地區(qū)的太平洋大牡蠣(Crassostrea gigage)、克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)、斑節(jié)蝦(Pena

5、eus monodon)、鯽魚(Carassius auratus)、黃鱔(Monopterus albus)等淡、海水產(chǎn)品共1849份進(jìn)行了弓形蟲檢測。其中牡蠣、斑節(jié)蝦、鯽魚和黃鱔的檢測結(jié)果全為陰性。僅在618只克氏原螯蝦中檢測到4例弓形蟲陽性,總陽性率為0.6472％,且這4例陽性全部來自于江西省南昌市,該地的陽性率為2.5％。結(jié)果顯示克氏原螯蝦可以通過濾食的方法來富集周圍環(huán)境中的弓形蟲卵囊。其作為人類和水生動(dòng)物弓形蟲病的潛在傳播途