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文檔簡(jiǎn)介
1、甜菜提供了全球約30%的食糖,是我國兩大糖料作物之一。由于甜菜的高度自交不親和性,常導(dǎo)致優(yōu)良植株基因型的丟失,給優(yōu)良育種材料的保存帶來了很大的困難。植物生物技術(shù)的發(fā)展為甜菜育種開辟了一條新途徑,其中,甜菜組織培養(yǎng)植株再生及快速繁殖體系的建立,是以重組DNA為特征的基因工程研究的前提。
本研究以二倍體純合系甜菜為材料,探索了甜菜植株再生體系;并將連接到植物表達(dá)載體上的抗逆基因OsAPX3轉(zhuǎn)化到甜菜體內(nèi),同時(shí)對(duì)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化條件
2、和方法進(jìn)行了比較研究。主要研究結(jié)果如下:
1.甜菜再生體系的建立
通過對(duì)影響再生的各種因素的分析研究,得出直接再生培養(yǎng)基配方:MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.5mg/L;確定再生率較高的外植體為葉柄;直接再生率較高的甜菜基因型編號(hào)為9號(hào);愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方:MS+6-BA0.5 mg/L+NAA2.0 mg/L;愈傷組織繼代培養(yǎng)基配方:MS+6-BA0.5 mg/L+NAA1.0 mg/L+IA
3、A1.0 mg/L;愈傷組織再分化培養(yǎng)基配方:MS+6-BA0.5 mg/L+ZT0.5 mg/L+NAA0.25 mg/L。
2.甜菜轉(zhuǎn)基因體系的優(yōu)化
對(duì)影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行了比較分析,確定轉(zhuǎn)化體篩選劑Km的濃度為100 mg/L;確定最適侵染菌液濃度為OD600=0.3;確定最適侵染時(shí)間為10 min;確定外植體與農(nóng)桿菌最適共培養(yǎng)天數(shù)為4 d;確定最適乙酰丁香酮加入濃度為100μmol/L。
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