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![太谷核不育小麥Ms2基因蛋白質(zhì)的表達差異.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/24d22d42-2d1d-4ed4-8a98-06602235b297/24d22d42-2d1d-4ed4-8a98-06602235b2971.gif)
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文檔簡介
1、本試驗以魯麥15為背景的太谷核不育小麥近等基因系(魯麥15,Ms2魯麥15和Rht10+Ms2魯麥15)不同時期的幼穗為材料,從蛋白質(zhì)組學(xué)角度利用雙向電泳技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)對太谷核不育基因Ms2的差異表達蛋白進行了研究,得出了以下結(jié)果:
1、經(jīng)多次重復(fù)建立了適用于小麥幼穗蛋白的雙向電泳體系。利用TCA-丙酮提取法提取了供試材料減數(shù)分裂期、單核期、二核期的全蛋白質(zhì)組取得了較好的效果。用PH4-7的24cm線性預(yù)制干膠條對所提取的
2、蛋白質(zhì)進行等電聚焦后,用濃度為12%的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后得到了分離效果較好的電泳圖譜。
2、在PH4-7,分子量10-115KD的范圍內(nèi),在減數(shù)分裂期得到約500個蛋白點,單核期、二核期得到600多個蛋白點。大多數(shù)等電點在PH4.5-7之間,分子量10-80KD之間居多。各個試驗材料的幼穗之間蛋白質(zhì)表達均存在差異,不同時期的差異蛋白有所不同,即不同時期表達的與育性相關(guān)的蛋白不同。
3、選取差異蛋白點,進
3、行膠內(nèi)酶解后進行MALDI-TOF-MS進行肽指紋圖譜分析。利用Mascot軟件對SWISSPROT數(shù)據(jù)庫搜索發(fā)現(xiàn)三個時期中共有47個差異蛋白質(zhì)點得分較高,均在50以上。選取了得分值較低(低于50分)的30個差異蛋白點進行了高效液相色譜質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)鑒定,有8個蛋白點獲得了較好的肽指紋圖譜。
4、鑒定出了與敗育相關(guān)的蛋白:減數(shù)分裂時期鑒定出的彈性蛋白酶抑制劑和50S核糖體蛋白L6,單核期鑒定出的含TPR重復(fù)的
4、硫氧還原蛋白TTL1,核酮糖1,5二磷酸羧化酶大亞基和ATP合成酶前體;以及二核期鑒定出的磷酸激酶,醌還原酶2和J結(jié)構(gòu)域蛋白是與育性相關(guān)的蛋白。另外,還有一些蛋白可能與育性有關(guān),減數(shù)分裂期的查爾酮異構(gòu)酶,細胞周期蛋白依賴性酶抑制因子1;單核期的F-box蛋白、UDP-葡萄糖4差向異構(gòu)酶、GTP結(jié)合蛋白yptV2;二核期的減數(shù)分裂重組蛋白SPO11-2、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、ras基因相關(guān)蛋白Rab7。
5、對鑒定出的蛋白
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