圓果黃麻不育類型鑒定及其蛋白質表達差異分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、黃麻(jute),椴樹科(Tiliaceae)黃麻屬(Corchorus)是喜溫短日性一年生草本韌皮纖維植物,具有耐環(huán)境脅迫能力強、適應性廣、纖維產量高、品質好等特性。
   本研究以圓果黃麻179,粵圓6號及其不育突變體為實驗材料,采用形態(tài)學觀察和雜交實驗方法鑒定出該突變體分別為高溫敏雄性不育突變體和雌性不育突變體。后在現蕾前期,現蕾期取粵圓6號及其不育突變體的功能葉,通過生理生化指標測定以及差異蛋白組學分析,旨在了解粵圓6號

2、正常可育材料與其雌性不育突變體之間的差異,揭示黃麻不育的生物學分子機理。本研究主要獲得以下結果:
   1.研究了黃麻花粉粒在體外萌發(fā)與溫度的關系,黃麻花粉粒在體外萌發(fā)的最佳溫度為28—30℃,在最佳溫度外隨著溫度的升高或下降其萌發(fā)率都下降,當上限溫度達到39℃時,花粉粒因受高溫影響基本上都不萌發(fā)了。在最佳萌發(fā)溫度下體外培養(yǎng),花粉粒在培養(yǎng)1h后開始萌發(fā),在3 h后其萌發(fā)率達到最大值。
   2.在鑒定黃麻不育突變體的類型

3、時,采用花粉粒體外萌發(fā)實驗和雜交驗證實驗對比分析了粵圓6號正??捎推洳挥蛔凅w材料花粉?;盍?發(fā)現不育突變體的花粉粒具有正常的活力;對兩材料處在同時期的花器官進行解剖觀察,不育突變體的花器官未見正常發(fā)育的柱頭,該材料為柱頭過早退化造成不育,屬于雌性不育株。
   3.比較了黃麻粵圓6號正??捎牧虾推洳挥蛔凅w材料在現蕾前期、現蕾期、結果期三個時期時功能葉和花蕾中的可溶性糖和可溶性蛋白的含量,結果表明可溶性糖和可溶性蛋白在不同

4、時期均表現動態(tài)變化。雌性不育突變體功能葉中的可溶性糖在現蕾前期的含量略低于正??捎牧?進入現蕾期和結果期,其可溶性糖卻比可育材料分別高出16.0%、33.3%,而花蕾組織中的可溶性糖比可育材料降低了15.5%;可溶性蛋白測定結果表明,粵圓6號3個不同時期功能葉和花蕾組織中可溶性蛋白的表達量分別比不育突變體高出3.9%、29.2%、79.1%、11.9%。上述代謝表達差異可能與雌性不育發(fā)生有關。
   4.蛋白質提取體系的建立,

5、黃麻葉片采用TCA-丙酮法比Tris-base/丙酮、Tris-HCl提取效率高、蛋白點明顯增加并且2-DE圖譜更清晰,其提取率為15.8%比Tris-base/丙酮法和Tris-HCl法分別高出43.6%和114.1%;樣品制備中的裂解采用超聲40 min,比32℃恒溫水浴裂解2 h的效果更加好;350μg為蛋白最佳上樣量。這為黃麻蛋白質組學后續(xù)研究奠定了基礎。
   5.比較了黃麻粵圓6號正??捎c其雌性不育突變體材料的蛋白

6、差異點,從46個差異蛋白點中挑選出重復性強的22個蛋白點進行MALDI-TOF-MS/MS串聯(lián)質譜分析,其中15個蛋白點成功鑒定,在這15個蛋白點中,其中7個在雌性不育株中表現為下調;有4個在不育株中表現上調;其余的蛋白點為特異表達點。這15個蛋白點經過鑒定為核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(4個)、結合α亞基的新生肽、細胞色素C氧化酶、ATP酶;磷酸甘油脂變位酶、磷酸丙酮異構酶、NAD(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)異構酶、核糖體蛋白S14、二氫

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