對(duì)蝦白斑綜合癥病毒LAMP及變性高效液相色譜檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、據(jù)對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的基因保守序列,利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer Explorer V3,設(shè)計(jì)了六條引物,建立了一種對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)檢測(cè)方法,并對(duì)LAMP反應(yīng)時(shí)間、溫度等反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。該檢測(cè)方法特異性好,與傳染性皮下和造血器官壞死病毒、斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒、肝胰腺細(xì)

2、小病毒、對(duì)蝦桿狀病毒以及對(duì)蝦基因組DNA無(wú)交叉反應(yīng);檢測(cè)靈敏度約為10-4ng/μl,比常規(guī)PCR檢測(cè)方法靈敏度高,與熒光定量PCR檢測(cè)方法靈敏度相當(dāng)。該檢測(cè)方法耗時(shí)短,約1個(gè)小時(shí)即可完成檢測(cè)。用建立的LAMP方法對(duì)46尾對(duì)蝦樣品進(jìn)行了臨床檢測(cè),結(jié)果與定量PCR方法檢測(cè)結(jié)果一致。WSSV的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法,準(zhǔn)確、特異、靈敏、成本低,適用于WSSV的早期及現(xiàn)場(chǎng)診斷。
  據(jù)對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(White Spot Syndro

3、me Virus,WSSV)的基因保守序列,使用Primer Explorer V3軟件設(shè)計(jì)了兩條引物,利用PCR的擴(kuò)增產(chǎn)物,結(jié)合變性高效液相色譜技術(shù)(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC),建立了一種對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的DHPLC快速檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法特異性好,與對(duì)蝦桿狀病毒、傳染性皮下和造血器官壞死病毒、肝胰腺細(xì)小病毒、斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒以及對(duì)蝦基因組DNA

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