煙草赤星病菌拮抗放線菌的篩選、發(fā)酵及活性物質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本試驗從秦嶺太白山區(qū)不同類型的土壤中采集土樣20個,并從中分離到了251株放線菌,經(jīng)室內(nèi)平板對峙拮抗作用測定,得到對煙草赤星病菌有不同程度拮抗作用的放線菌51株,其中抑菌圈直徑超過13mm的有12株。測定這12株的抗菌譜,通過皿內(nèi)平板初篩、液體發(fā)酵復篩和單孢分離,得到了一株對多種植物病原真菌拮抗性較好且遺傳穩(wěn)定的新菌株LJ198-7。 本文對拮抗菌LJ198-7產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的發(fā)酵培養(yǎng)基、發(fā)酵溫度、初始pH及通氣量等因子進行了初篩

2、,并對其搖瓶發(fā)酵條件進行了初步研究。研究表明LJ198-7菌株的適宜發(fā)酵培養(yǎng)基是:黃豆餅粉2%,葡萄糖1%,淀粉1.5%,碳酸鈣0.25%,磷酸氫二鉀0.05%。其適宜的搖瓶發(fā)酵條件是:初始pH值8.0、發(fā)酵溫度30-34℃、搖床轉(zhuǎn)速150r/min、發(fā)酵時間72h。培養(yǎng)基成分的正交試驗結(jié)果表明,氮源是影響發(fā)酵液對赤星病菌抑菌活性的主要因素,發(fā)酵條件中培養(yǎng)時間是影響發(fā)酵液對赤星病菌抑菌活性的主要因素,其次是初始pH值,培養(yǎng)溫度和搖床轉(zhuǎn)速

3、。 對LJ198-7活性產(chǎn)物粗提物的抑菌譜測定,發(fā)現(xiàn)該菌株有對十幾種病原菌有較強的抑制作用,尤其對水稻稻瘟、玉米大斑、小麥根腐、黃瓜枯萎、番茄灰霉等病原真菌及十字花科軟腐等細菌抑制率較高,1mg/1藥劑濃度的抑制率都在45%以上,為該抗生素的應用領(lǐng)域提供了依據(jù)。 通過對LJ198-7的活性產(chǎn)物進行分離純化,得到一個新的單組分化合物,其理化特性及結(jié)構(gòu)初步分析結(jié)果為:此化合物紫外最大吸收波長為316nm;易溶于水、乙醇、甲醇

4、等低級醇,幾乎不溶于丙酮、乙醚、乙酸乙脂、乙酸丁脂、苯、三氯甲烷;熔點241-244℃;分子量為314;比旋光度:∣α∣D =-32°,用正丁醇:冰乙酸:水=4:1:1的條件下進行硅膠薄層層析,其Rf=0.40;與雙縮脲試劑、品紅和三氯化鐵試劑反應為陰性,鄰苯二甲酸-苯胺、茚三酮反應呈陽性,推知此新化合物為氨基糖苷類化合物,結(jié)合波譜分析結(jié)果將該化合物命名為1-(3-呋喃基-4-?;?-2-N-氨基脒基葡萄苷,這是在氨基糖苷類化合物中發(fā)現(xiàn)

5、的一種新抑菌活性物質(zhì),從而為新的氨基糖苷類農(nóng)用抗生素的研發(fā)打下了良好基礎(chǔ)。 對LJ198-7的活性產(chǎn)物拮抗機理的初步研究表明:LJ198-7活性產(chǎn)物能強烈抑制病原菌菌絲的生長和孢子的萌發(fā),引起病原菌菌絲扭曲或膨大、分枝增多、分枝頂端細胞壁破裂、原生質(zhì)外溢,產(chǎn)生溶菌作用:分生孢子數(shù)減少,孢子萌發(fā)率降低、芽管畸形; 溫室條件下,LJ198-7活性產(chǎn)物不僅能煙草赤星病菌菌絲入侵,對煙草赤星有預防作用,而且對已侵入的菌絲也有很好

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