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![拮抗放線(xiàn)菌FX-H-51的篩選及其活性物質(zhì)的研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/8/1d30afda-8339-4b8c-ac7b-dbbb1e87cbdb/1d30afda-8339-4b8c-ac7b-dbbb1e87cbdb1.gif)
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1、本研究從土壤中分離、篩選出對(duì)多種植物病原真菌具有良好拮抗作用的放線(xiàn)菌,最終獲得一株對(duì)禾谷絲核菌具有高效抑制活性的拮抗放線(xiàn)菌FX-H-51菌株。對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定,液態(tài)發(fā)酵條件優(yōu)化,并以不同的分離純化方法純化抑菌活性物質(zhì)。主要研究結(jié)果如下:
1、放線(xiàn)菌的分離對(duì)采自山西、陜西、甘肅黃土高原地區(qū)的蘋(píng)果根際土壤20余份、山東麥田根際土壤30余份樣品,室內(nèi)進(jìn)行自然干燥等預(yù)處理后,采用平板稀釋法,高氏1號(hào)培養(yǎng)基中加80 mg/L的重鉻酸鉀進(jìn)
2、行放線(xiàn)菌的選擇性分離,共分離得到217株放線(xiàn)菌。
2、高抑菌活性菌株的篩選以禾谷絲核菌( Rhizoctonia cerealis)、平臍蠕孢菌(Bipolaris sorokiniana)、黃色鐮孢菌(Fusarium culmorum)為靶標(biāo)菌,采用平板對(duì)峙法、灰色關(guān)聯(lián)度分析法進(jìn)行拮抗菌的篩選,利用平板對(duì)峙法篩選出抑菌效果較好的4株放線(xiàn)菌 FX-H-51、FX-H-71、FX-S-114、FX-S-178;利用灰色關(guān)聯(lián)度分
3、析法對(duì)這4株菌株的生防效果及耐受性狀進(jìn)行綜合評(píng)價(jià),證明放線(xiàn)菌菌株FX-H-51綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)最好,不僅對(duì)病原真菌的有較好的抑制作用,而且對(duì)不利的生長(zhǎng)環(huán)境有良好的耐受性。
3、放線(xiàn)菌分類(lèi)地位鑒定對(duì)FX-H-51菌株進(jìn)行形態(tài)和培養(yǎng)特征觀察、生理生化特性測(cè)定以及16SrDNA序列分析確定其分類(lèi)地位。其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征均與鏈霉菌屬一致;16SrDNA全序列共有1447 bp,與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中相關(guān)序列比對(duì),F(xiàn)X-H-51菌株與海
4、棠鏈霉菌(Streptomyces spectabilis)的同源性為99%,系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中親緣關(guān)系最近。由于FX-H-51菌株的生理生化特征與海棠鏈霉菌(Streptomyces spectabilis)存在一定的差異,初步鑒定FX-H-51菌株為海棠鏈霉菌的變種。
4、發(fā)酵條件的優(yōu)化利用單因子試驗(yàn)和正交試驗(yàn)相結(jié)合的手段,對(duì)FX-H-51菌株發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明,在液體培養(yǎng)基主要成分為麥芽糖50.3 g、胰蛋白胨9.6
5、g、NaCl2.5 g、CaCO32.0 g、蒸餾水1000 ml時(shí),最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)條件是100 ml裝液量、200r/min、pH8.0、28℃培養(yǎng)7 d。
5、發(fā)酵產(chǎn)物穩(wěn)定性測(cè)定為了了解FX-H-51菌株產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)的理化性質(zhì),對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。結(jié)果表明,抑菌活性物質(zhì)在室溫和低溫時(shí)熱穩(wěn)定性良好;在pH值3.0~11.0的條件下性質(zhì)比較穩(wěn)定;在紫外線(xiàn)處理45 min后仍具有較高的抑菌活性。
6、發(fā)酵液粗
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