1、狂犬病是一種重要的人獸共患傳染病，近年來狂犬病在我國的發(fā)生呈逐年上升的趨勢，究其原因，除了免疫措施不到位、免疫效果低下之外，無法及時對狂犬疫苗免疫后血清中和抗體效價進行檢測，因此不能實現(xiàn)人群及動物種群的免疫檢測也是主要原因之一。按照世界衛(wèi)生組織(WHO)及國際獸疫局(OIE)的要求，人或動物接種狂犬病疫苗后，需測定其血清內(nèi)的抗狂犬病病毒(Rabiesvirus，RV)中和抗體效價，不低于0.5IU/ml[1]時，方可認為達到有效保護，否

2、則應(yīng)予加強免疫，直至達到保護水平。
　　 當(dāng)前，檢測狂犬病病毒中和抗體國際通用方法主要包括小鼠中和試驗（MNT）、熒光抗體病毒中和試驗(FAVN)和快速熒光灶抑制試驗（RFFIT）。其中MNT法操作比較復(fù)雜，需要在動物P3實驗室進行且實驗周期長，難以推廣應(yīng)用和達到快速檢測;FAVN是以100TCID50的狂犬病病毒完全被血清抑制作為判定標(biāo)準(zhǔn)，是國際狂犬病參考實驗室最主要的動物狂犬病中和抗體監(jiān)測方法，主要用于犬血清的檢測;快速熒光

3、灶抑制試驗(RFFIT)是用80％最適感染量的病毒與抗狂犬病血清相中和，計算出中和50％病毒量的最高血清稀釋度，并與已知效價的血清標(biāo)準(zhǔn)品對照計算出血清中和抗體效價，RFFIT方法操作簡便快捷，重復(fù)性好，整個實驗過程比MNT和FAVN耗時短，是WHO和OIE的現(xiàn)行推薦方法之一，也是我國藥典規(guī)范應(yīng)用的狂犬病病毒中和抗體檢測方法，既可用于人的狂犬病病毒中和抗體測定，也可用于動物的狂犬病病毒中和抗體測定。目前，我國只有武漢生物制品研究所和中國藥

4、品生物制品檢定所具有本項技術(shù)，本研究于中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所腦炎室進行，以便在疾病預(yù)防控制系統(tǒng)建立此方法并進行初步應(yīng)用。
　　 本研究結(jié)果建立了狂犬病病毒中和抗體快速熒光灶抑制試驗（RFFIT），初步應(yīng)用成功。
　　 本研究首先培養(yǎng)BSR細胞，低代次傳代培養(yǎng)后進行了凍存，共凍存了40管，建立了BSR細胞庫。用直接免疫熒光試驗方法(DFA)測定狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)攻擊種病毒CVS-11株的滴度為1.7×107FFU/

5、ml，按照MOI=0.1的比例接種BSR細胞，制備CVS-11貯存用病毒庫共500ml，并分裝于凍存管凍存于-80℃冰箱內(nèi)儲存。同樣用DFA的方法測定貯存用病毒的滴度為2×107FFU/ml;測定貯存病毒的最適攻擊量為6×106FFU/ml，應(yīng)用于RFFIT試驗中;設(shè)定病毒對照、細胞對照、標(biāo)準(zhǔn)血清對照、陰性血清對照、強陽性血清對照和弱陽性血清對照六項對照系統(tǒng)，以Reed&Muench法公式和MicrosoftExcel軟件為基礎(chǔ)，設(shè)計被

6、測樣品中和效價計算公式。應(yīng)用建立好的RFFIT系統(tǒng)進行大批量的血清檢測，評價該檢測系統(tǒng)的特異性、敏感性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性，結(jié)果表明本實驗室建立的RFFIT檢測系統(tǒng)可以應(yīng)用于狂犬病特異性中和抗體的檢測。
　　 國產(chǎn)成大疫苗分別按照五針法和2-1-1四針法肌肉注射免疫程序?qū)?12位志愿者進行暴露前免疫接種，然后分別在接種第0、7、14、45天時進行采血，共采集血清標(biāo)本471份。用RFFIT方法對采集的471份血清進行狂犬病中和抗體的

7、檢測，結(jié)果:國產(chǎn)成大疫苗五針法免疫和2-1-1四針法免疫所得到的免疫效果差異在統(tǒng)計學(xué)上沒有意義，其中2-1-1四針法免疫后第七天的中和抗體GMT比五針法稍高，且陽轉(zhuǎn)率也要稍高于五針法;國產(chǎn)成大疫苗2-1-1四針法和進口雞胚疫苗2-1-1四針法的免疫效果差異在統(tǒng)計學(xué)上沒有意義，其中第七天的陽轉(zhuǎn)率也要高于進口雞胚疫苗。
　　 近年來中國人用狂犬病疫苗的生產(chǎn)量不斷增加，每年因狂犬病暴露而接受暴露后治療人數(shù)接近1000萬，但暴露后治療的