草魚腸道優(yōu)勢固有菌的鑒別及產纖維素酶菌株的篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、草食性的草魚擁有著強大的分解水草的能力,同時,有研究報道在草魚腸道中檢測到纖維素酶活性或者產纖維素酶細菌。目前,對于草魚腸道內的產纖維素酶細菌有哪些,這些細菌是固有共生細菌還是因為攝食等其它原因產生的等問題,并不是很清楚。甄別宿主體內細菌是固有細菌還是外來細菌,是了解細菌和宿主之間相互關系的前提。 通過對16srDNA文庫的隨機序列測序,本研究調查了空腹草魚腸道以及其他有著連接的組織(膽囊和肝胰臟)中的細菌多樣性和菌群豐度。結果

2、表明,(1)草魚腸道組織的細菌群落組成以氣單胞菌(Aeromonas)為主,其次依次為摩根菌(Morganella)、假單胞菌(Pseudomonas)和耶爾伸菌(Yersina),普羅威登斯菌(Providencia)、弧菌(Vibrio)和不動桿菌數量(Acinetobacter)相對較少;草魚膽囊以氣單胞菌(Aeromonas)為主,肝胰臟以氣單胞菌(Aeromonas)和假單胞菌(Pseudomonas)為主。(2)鑒定出腸道中

3、細菌28株、膽囊中10株和肝胰臟中19株,以上菌株均歸屬于變形桿菌的gamma亞群,分屬于不同的8個細菌屬。(3)在膽囊、肝臟和腸道均有分布的相同菌株,共有3株,其中2株隸屬于氣單胞菌和1株隸屬于假單胞菌。除此之外,膽囊和肝臟中相同菌株還有1株變形桿菌、2株氣單胞菌和1株假單胞菌;膽囊和腸道中相同菌株還有2株氣單胞菌、1株假單胞菌和1株摩根菌;肝臟和腸道中相同菌株還有1株氣單胞菌、1株假單胞菌和1株摩根菌;(4)這些共同擁有的細菌我們稱

4、之為共生細菌,在研究中一共找到了10種共生細菌,占了55.33%。這10種共生細菌在腸道中都能檢測到,在膽囊中有7種,肝胰臟中有6種。(5)這10種共生細菌都隸屬于三種細菌基因:氣單胞菌,假單胞菌和摩根菌。其中氣單胞菌數量最多,占28.38%,其次為摩根菌占20.78%,假單胞菌占6.17%。在這些細菌中,Morganellasp,JB-T11,Aeromonasveronii,和Aeromonassobria這三種細菌數量最多,分別占

5、了17.08%,12.35%和8.64%。 另外采用PCR-DGGE分子生物學策略以分析16SrDNA特征序列對細菌類群進行分析,共鑒定出草魚腸道中的13種細菌。草魚腸道組織中的細菌都隸屬于以下這五種細菌基因:氣單胞菌(Aeromonas),假單胞菌(Pseudomonas),耶爾森菌(Yersina),希瓦菌(Shewanella),沙門菌(Salminella)。其中,氣單胞菌為占優(yōu)勢的細菌,占了46.13%,其次為假單胞菌

6、,占了30.77%。耶爾森菌,希瓦菌,沙門菌各占7.69%。 運用改良過的剛果紅培養(yǎng)基篩選草魚腸道中的產纖維素酶細菌,得到產纖維素酶細菌的單克隆66個。其中透明水解圈D(mm)/菌落直徑d(mm)大于等于5的產纖維素酶細菌有19個。運用16SrDNA分子技術分析這19個細菌,得到3個不同序列和16個重復序列。其中兩個序列經過比對鑒定為Aeromonasveronii,另一個序列經過比對鑒定為Aeromonashydrophila

7、,這2種細菌均隸屬于氣單胞菌(Aeromonas)。這兩種細菌在草魚腸道和膽囊中都有被檢測到,說明這2種產纖維素酶細菌是草魚腸道中的共生細菌。Aeromonasveronii在草魚腸道中占了12.35%的相對豐度,Aeromonashydrophila在草魚腸道中占了1.23%的相對豐度。 本研究利用不依賴于細菌分離培養(yǎng)的分子鑒定技術,通過比較腸道以及與其相連接器官組織的細菌組成,確定了腸道共生細菌類群并得出了相對的種群優(yōu)勢,在

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