1、落葉松（Larix spp.）是重要的速生造林樹種，目前其體細胞胚胎發(fā)生作為一種新的繁殖技術已取得突破性進展。然而，胚性細胞誘導困難、畸形胚的出現(xiàn)和同步化困難等還是胚性細胞誘導過程中尚待解決的瓶頸問題，而分子機制的研究可能給體細胞胚胎發(fā)育帶來新的變革。目前體細胞胚胎發(fā)育相關基因基因已經(jīng)克隆到多個，但是大多數(shù)都是在體細胞胚胎發(fā)育后期起作用，SERK1是目前為止唯一發(fā)現(xiàn)在體細胞胚胎發(fā)育前期起作用的基因。SERK1基因是體胚發(fā)生早期的重要基因

2、，因此研究落葉松SERK1基因在落葉松體細胞胚胎發(fā)生過程早期由愈傷組織轉變?yōu)榕咝约毎倪^程中所起的作用對于落葉松體細胞胚胎發(fā)生的研究具有重要意義。本研究從體細胞胚胎發(fā)生相關受體類蛋白激酶SERK1入手，克隆了日本落葉松（Larix leptolepis）體細胞胚胎發(fā)生相關受體類蛋白激酶基因LaSERK1，對其進行了表達模式分析和原核表達并進行了抗體制備。主要研究結果如下:
　　 (1)克隆了落葉松體細胞胚胎發(fā)生相關受體類蛋白激酶

3、LaSERK1基因，并將其翻譯為蛋白后與其他物種SERK1進行了一級結構和高級結構比對，比對后發(fā)現(xiàn)它們有高度相似性;
　　 (2) qRT-PCR結果顯示胚性細胞在含有脫落酸(Abscisic acid，ABA)激素的成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，LaSERK1在體胚發(fā)生早期高表達，但是在第七天時明顯降低，之后的各階段基本呈遞減趨勢。這些結果表明LaSERK1可能在落葉松體胚發(fā)育早期起重要作用;
　　 (3)當胚性細胞在無激素簡單

4、繼代培養(yǎng)基中生長時，LaSERK1基因的表達比在含有2，4-D和BA的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞低很多，說明激素2，4-D和BA對LaSERK1基因的表達有一定的誘導作用;
　　 (4)構建了pSuper1300-GFP-LaSERK1亞細胞定位載體，證明LaSERK1定位在細胞膜上的，這也與其作為受體的功能相對應;
　　 (5)構建了LaSERK1蛋白胞外段原核表達載體pET28a(+)-His-ecLaSERK1，在體外

5、對LaSERK1蛋白胞外段結構域進行了原核表達，并以此肽段為抗原制備了相關抗體，使用ELISA技術對其抗體進行了效價檢測，得到較好的結果（效價1∶2500），日后可以將此抗體用于對體細胞胚胎發(fā)育過程中各階段LaSERK1蛋白表達量的Western blot檢測以及用于免疫組化實驗以研究體細胞胚胎發(fā)育過程中各階段LaSERK1蛋白在胚團和成熟胚中的表達位置。
　　 綜上所述，LaSERK1可能在落葉松體胚發(fā)育早期起重要作用，且在體