鷹嘴豆熱激轉(zhuǎn)錄因子CarHSFB2的克隆與功能驗證.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著全球環(huán)境的不斷惡化,不良的生長環(huán)境成為影響植物生長和產(chǎn)量的一個重要因素。鷹嘴豆是世界第三大豆類作物,它生育期短,抗逆性強,基因組小,在挖掘抗逆關(guān)鍵基因和解析植物生長發(fā)育及耐逆分子機制方面擁有巨大的潛力。然而,目前該作物在分子生物學方面的研究較為缺乏。對逆境的反應是生物體的一種自我保護機制,熱激轉(zhuǎn)錄因子HSF是植物轉(zhuǎn)錄因子家族中較大的一類,調(diào)控熱激蛋白的表達,而熱激蛋白作為分子伴侶促使其他蛋白重新折疊、穩(wěn)定、組裝、胞內(nèi)運輸和降解,對受

2、損蛋白的修復和細胞的存活起著重要的作用。而HSF在轉(zhuǎn)錄水平上實現(xiàn)對逆境反應的調(diào)控,是一種經(jīng)濟而靈活的調(diào)節(jié)機制,同時由于熱激轉(zhuǎn)錄因子處于信號傳導的下游,對生物和非生物逆境都有很強的反應。目前關(guān)于熱激轉(zhuǎn)錄因子的研究主要集中在擬南芥、水稻、番茄等少數(shù)模式作物上,而鷹嘴豆中的HSF基因的克隆與功能分析尚未有報道,本研究在鷹嘴豆中分離并克隆了一個熱激轉(zhuǎn)錄因子CarHSFB2,廣泛地進行了發(fā)育和脅迫相關(guān)的表達分析,并且通過轉(zhuǎn)基因研究初步分析了Car

3、HSFB2的功能。本研究的主要結(jié)果如下:
   CarHSFB2編碼一個長度為267aa的蛋白,含有一個長度為87bp的內(nèi)含子。系統(tǒng)進化樹分析表明CarHSFB2屬于B類HSF家族。多重序列比對發(fā)現(xiàn)CarHSFB2與其他植物B類HSF序列具有高度的保守功能區(qū)域和內(nèi)含子插入位點。亞細胞定位實驗證實了CarHSFB2定位于細胞核中,Southern blot實驗表明CarHSFB2在鷹嘴豆基因組中是一個單拷貝或低拷貝的基因。

4、   利用半定量RT-PCR技術(shù)廣泛地調(diào)查了CarHSFB2的表達規(guī)律,CarHSFB2在鷹嘴豆葉片的衰老過程和種子萌發(fā)以及發(fā)育過程都有明顯的上調(diào)表達。同時CarHSFB2受熱激脅迫、氧化脅迫、鹽脅迫、干旱脅迫的誘導上調(diào)表達。在IAA處理條件下,CarHSFB2呈現(xiàn)上調(diào)表達的趨勢,而在受到GA3和6-BA處理的鷹嘴豆中呈現(xiàn)下調(diào)的趨勢。表明CarHSFB2基因的功能既涉及植物生長發(fā)育的調(diào)節(jié)有參與多種環(huán)境脅迫的響應。
   在對組

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