中國水仙ACS基因克隆及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以中國水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)和轉(zhuǎn)ACS反義基因的中國水仙試管小鱗莖為試驗材料，進行如下研究：①葉片ACS基因同源克??；②愈傷組織培養(yǎng)條件的優(yōu)化；③初代轉(zhuǎn)基因試管苗小鱗莖繼代增殖和移栽。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、中國水仙葉片ACS基因的克隆
　　 采用申能博彩RNA試劑盒與TRIZOL試劑相結(jié)合的方法提取的總RNA，其完整性比較好、純度高、量也較大，能夠較好的去除

2、多糖多酚，是提取中國水仙葉片總RNA行之有效的方法。應(yīng)用同源克隆結(jié)合RACE技術(shù)，獲得中國水仙葉片ACS的cDNA片段1427bp，包含3’端17個poly(A)尾。該序列與登入GenBank的其他植物ACS基因有較高的同源性，序列分析發(fā)現(xiàn)該片段包含一個最大為1200bp的閱讀框，編碼400個氨基酸，TAA為終止密碼子，已在GenBank上登錄，登錄號為GU182503。
　　 2、中國水仙愈傷組織培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究
　　

3、 本試驗以中國水仙鱗莖為供試材料，以鱗莖盤切塊為外植體誘導愈傷組織，對中國水仙愈傷組織的培養(yǎng)進行研究，優(yōu)化其繼代增殖條件。在暗培養(yǎng)的條件下，采用對稱分布的方式接種在附加2,4-D1.0mg/L、KT0.1 mg/L、BA0.5mg/L、30g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上，最有利于中國水仙愈傷組織的培養(yǎng)。
　　 3、初代轉(zhuǎn)基因試管苗的繼代增殖和移栽
　　 研究結(jié)果表明：初代轉(zhuǎn)基因試管苗小鱗莖在附加6-BA2.0mg/L、2,4

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