1、1光合細菌分離篩選與培養(yǎng)光合細菌分離篩選與培養(yǎng)著色菌屬或稱紅硫菌屬的分離與純化培養(yǎng)，著色細菌與綠菌屬一樣也是光合細菌，但它們除了含有葉綠素外，還含有胡羅卜素，而且后者占優(yōu)勢。其細胞除球形外有柱狀，偶有彎曲有莢膜及極生鞭毛，能運動，細胞團塊呈深淺不一的紅色或紫紅色。在有硫化氫條件下生長時，能氧化硫化氫與硫，累積硫于細胞內(nèi)，而綠色硫細菌卻沉硫于細胞外。分布在有腐爛藻類植物的海泥和淡水泥中。1分離培養(yǎng)基成分及其配制，由于此種完全培養(yǎng)基的有些成

2、分不能在高壓滅菌或在高溫下不相容必須先制備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后把其他成分的無菌溶液加到冷基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：NH4Cl0.1克KH2PO40.1克MgCl20.05克NaCl海生種30克淡水種10克瓊脂20克水925毫升，溶解以上無機鹽于水中，加入瓊脂，加熱至121℃15分鐘，使瓊脂溶解，分裝于試管或螺旋口瓶里121℃蒸汽下滅菌15分鐘。不加瓊脂可作為液體培養(yǎng)基。（2）無菌碳酸氛鈉溶液：將NaHCO35克加水至100毫升，在1

3、21℃蒸汽下滅菌15分鐘。（3）無菌硫化鈉溶液：此液既作為HS的來源，又起脫氧劑作用，若是預先配制，必須把它保存在沒有氧的密閉容器里，否則應在臨用前配制。取Na2S9H2O5克加水至100毫升，在121℃蒸汽下滅菌15分鐘（4）完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基（融化冷至45℃）10毫升NaHCO3溶液0.4毫升Na2S9H2O0.2毫升，依次無菌地如到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻后可用。2.分離與純化培養(yǎng)（1）分離培養(yǎng)：在廣口玻璃瓶底放一層0.51厘米厚的

4、混有腐爛海藻的海泥，用海水覆蓋，暴露于光下。直至培養(yǎng)器最靠近光源的壁上長出紅色菌為止。這些紅色生長物通常含有著色菌它的生長決定于泥中硫酸鹽的還原，和隨后釋放的H2S。（2）純化培養(yǎng)①深層試管法：a、選取具有著色菌特征的紅色生長物（已用顯微鏡檢查過細胞形態(tài)），放于一定量的完全培養(yǎng)液中，混勻。b準備一系列深層融化的完全培養(yǎng)基管，并保存在45℃水溶中，將混勻于培養(yǎng)液中的生長物稀釋成一系列稀釋度。c每支試管用經(jīng)160℃滅菌1小時的固體石蠟和液體

5、石蠟1:1的混合物覆蓋，每管蓋2厘米高。3深處把氧氣迅速消耗，很快就形成厭氧條件。如用前一種分離法，可用焦性沒食子酸和碳酸鈉造成厭氧條件或于其他的缺氧條件下培養(yǎng)，挑選具有此類細菌特征的菌落作穿刺接種，管口塞緊后封蠟，培養(yǎng)，備用。1.培養(yǎng)基：（1）酵母膏0.5gLNH4C11.0gLNaAC3.5gLMgCL20.1gLCaC120.1gLKH2PO40.6gLK2HPO40.4gLPH7.27.4（富集用）★(2)酵母膏1.0gL羥基丁

6、二酸（蘋果酸）0.5gLNH4C11.0gLNaAC3.0gLNaC11.0gLNaHCO31.5gLK2HPO40.2gLMgSO40.2gLPH7.07.2（專利富集用）(3)酵母膏0.1gLNaAC3.0gL(NH4)2SO41.0gLMgSO40.2gLNaC11.0gLKH2PO40.3gLK2HPO40.5gLCaC120.05gLPH7.27.4（分離純化用）(4)酵母膏3gL蛋白胨3gLNaC110gLMgSO40.5g

7、LKH2PO40.25gLPH7.27.4（計數(shù)保存用）★(5)酵母膏0.5gLNH4C11.0gLNaAC3.0gLMgC120.1gLNaHCO31.5gLCaC120.1gLNaC11.0gLKH2PO40.6gLK2HPO40.4gL黃腐酸0.2gL或蘋果酸0.3gLPH7.27.4（富集分離用）可加促進劑黃腐酸0.10.3gL乙醇3.0gL代替NaAC作碳源PH上升慢（專利）?！?6)酵母膏0.1gLNaAC3.0gL丙酸鈉0

8、.3gLNaC10.5gLNH4C11.0gLMgSO40.2gL蛋白胨0.01gL谷氨酸0.21000gLK2HPO40.3gLKH2PO40.5gLCaC120.05gLMnC120.003gLFeSO40.005gLPH7.27.4（分離純化用）(7)NH4Cl0.1gNaHCO30.1gKH2PO40.02gCH3COONa0.10.5gMgSO4.7HO20.02gNaCl0.050.2g生長因子１ml微量元素溶液１ml蒸餾水