1、藻膽蛋白是藍(lán)藻進(jìn)行光合作用必不可少的捕光復(fù)合體。本文采用分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)工程方法研究藍(lán)藻藻膽蛋白的降解機(jī)制，將為從源頭控制藍(lán)藻生長、解決水華問題提供重要的幫助。本研究主要內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　 ⑴利用多質(zhì)粒組合在大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行重組，得到了具有光學(xué)活性的色素蛋白PCB-CpcB(84位)和PCB-CpcB(155位)。對體內(nèi)重組色素蛋白進(jìn)行光譜分析，吸收光譜和熒光光譜均表明藻藍(lán)膽素與脫輔基蛋白CpcB形成了共價(jià)連接，從而證實(shí)在

2、大腸桿菌體內(nèi)成功生成了色素蛋白PCB-CpcB(84位)和PCB-CpcB(155位)。藻膽蛋白體內(nèi)重組的實(shí)驗(yàn)研究有助于進(jìn)一步了解藻膽體的構(gòu)成并對藻膽蛋白在實(shí)踐中的應(yīng)用具有重要意義。
　　 ⑵將質(zhì)粒p ET-oA、pET-oB、pET-rA、pET-cA和pET-cpcA轉(zhuǎn)化大腸桿菌獲得表達(dá)菌種，進(jìn)行大量表達(dá)，分別獲得四種蛋白酶OA、OB、RA、CA與脫輔基蛋白CpcA。同時(shí)利用大腸桿菌大量表達(dá)并純化了五種體內(nèi)重組色素蛋白PCB

3、-ApcA、PCB-ApcB、PCB-CpcA、PCB-CpcB(84位)和PCB-CpcB(155位)。
　　 ⑶研究了OA、OB、RA、CA四種蛋白酶與藻膽蛋白降解之間的關(guān)系。首先在體外進(jìn)行了這四種蛋白酶與脫輔基蛋白CpcA之間的復(fù)合物實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明四種蛋白酶與脫輔基蛋白之間均未形成復(fù)合物。其次進(jìn)行了四種蛋白酶分別對五種色素蛋白PCB-ApcA、PCB-ApcB、PCB-CpcA、PCB-CpcB(84位)和PCB-Cp

4、cB(155位)的酶活性研究，并對不同溫度下蛋白酶的活性大小進(jìn)行分析比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明四種蛋白酶對于不同的色素蛋白活性顯著不同，其中蛋白酶OA的酶活性最大，RA的活性次之，CA的活性最小，而OB對五種色素蛋白均沒有活性。同時(shí)隨著溫度的升高，OA、RA和CA蛋白酶的活性顯著升高。
　　 ⑷酶活性實(shí)驗(yàn)證實(shí)了OA、RA和CA蛋白酶對于不同的色素蛋白均顯示出酶活性，但活性又顯著不同，說明藻膽體的降解機(jī)制十分復(fù)雜，藻膽蛋白的降解過程很可能

5、存在多種酶的協(xié)同作用。三種蛋白酶可能都參與了藻膽蛋白的降解過程，但在降解過程的作用有所不同。OA蛋白酶酶活性最好，推測其參與藻膽蛋白的降解過程并可能發(fā)揮重要作用。但在復(fù)合物實(shí)驗(yàn)中并未發(fā)現(xiàn)OA等蛋白酶直接與CpcA形成復(fù)合物，說明蛋白酶與CpcA之間的相互作用雖然存在，但形成復(fù)合物的過程可能還需要其他輔助因子的參與.這需要在后繼的研究中進(jìn)一步探明。本文的研究結(jié)果將對藻膽蛋白降解機(jī)制的研究提供有用數(shù)據(jù)并為從分子生物學(xué)層次上解決藍(lán)藻水華問題奠