1、中南大學博士學位論文Math5調控視網膜Müller細胞向神經節(jié)細胞定向分化的研究姓名：曾琦申請學位級別：博士專業(yè)：眼科學指導教師：夏曉波20100501博士學位論文 中文摘要第二章P E G F P - N 1 ．M a t h 5 真核表達質粒的構建及視網膜干細胞轉染目的 構建P E G F P - N 1 ．M a t h 5 真核表達質粒。探討以M t i l l e r 細胞去分化而來的視網膜干細胞作為基因靶細胞，電

2、穿孔法轉染M a t h 5基因的可行性。方法 構建真核細胞表達質粒P E G F P ．N 1 ．M a t h 5 。采用酶切及基因測序鑒定。然后選用脂質體轉染和電穿孔轉染的方法，分別將m a t h 5基因轉染M t i l l e r 細胞去分化而來的干細胞，熒光顯微鏡下觀察，并檢測轉染效率。結果連接產物經E c o R I 及B a m H I 雙酶切鑒定，產生約4 ．7 k b和4 5 0 b p 的兩個D N A 片段，與

3、連接前載體和插入片段大小相符，證實成功獲得了P E G F P ．N 1 ．M a t h 5 重組真核表達質粒。重組質粒P E G F P ．N 1 ．M a t h 5 的正、反向序列測定分析顯示，M a t h 5 的序列與G e n eB a n k 中M a t h 5e D N A 的序列完全一致。陽離子脂質體L i p o f e c t a m i n e2 0 0 0 和電穿孔法介導M a t h 5 基因轉染M f

4、i l l e r 細胞去分化而來的干細胞，4 8 h 時轉染效率均達到最高，分別為O ．1 3 + 0 ．1 7 ％和1 5 ．5 4 + 2 ．4 3 ％。電穿孔法較脂質體法轉染的細胞內M a t h 5 基因有更好的表達，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義( P < O ．0 1 ) 。結論 電穿孔法可使視網膜M f i l l e r 細胞去分化而來的干細胞得到較高效的基因表達。這將為視神經再生的基因治療和進一步的干細胞研究奠定基礎