1、復旦大學碩士學位論文MNU致大鼠視網(wǎng)膜變性對Müller細胞生物學特性的影響姓名：王芳申請學位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學指導教師：周國民20060510復旦大學碩士學位論文二、結(jié)果1 、流式細胞儀檢測顯示，M N U 注射后1 d 視網(wǎng)膜細胞凋亡率最高，達3 0 ％，以后細胞凋亡率逐漸下降。第2 、3 d 的凋亡率分別為2 8 ％和1 1 ％，至5 d 左右凋亡現(xiàn)象消失。T U N E L 法顯示，M N U 注射后

2、第2 d 視網(wǎng)膜外核層出現(xiàn)成片凋亡的細胞。2 、免疫細胞化學染色顯示，正常大鼠視網(wǎng)膜M u l l e r 細胞有G S 表達，M u l l e r細胞的輪廓清晰，細胞核位于內(nèi)核層，突起呈典型的放射狀，向內(nèi)側(cè)和外側(cè)延伸，分別止于內(nèi)界膜至外界膜。3 、M N U 損傷后第2 d 及3 d ，外核層還比較厚，r h o d o p s m 陽性表達細胞有很多層；損傷后第5 d ，外核層變得非常薄，r h o d o p s i n 陽性表

3、達細胞也只有一層，細胞數(shù)量稀少；至損傷后第7 d ，r h o d o p s i n 陽性表達細胞雖也只有一層，但是細胞數(shù)量較第5 d 時增多。在損傷后第5 d ，未見G S 和r h o d o p s i n 的共表達現(xiàn)象，而損傷后第7 d ，G S 和r h o d o p s m 的共表達現(xiàn)象則非常明顯。4 、注射M N U 后，大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)核層即開始有P C N A 的表達，并與G S 共存。P C N A 的表達在M N

4、U 注射后第3 d 達最高峰，至5 d 左右P C N A 的表達逐漸向外核層轉(zhuǎn)移。與此同時， M U l l e r 細胞也開始表達神經(jīng)干細胞抗原n e s t i n ，并且，隨著損傷時間的延長，n e s t i n 的表達也逐漸增強。5 、腹腔注射M N U 后，R T - P C R 檢測顯示I G F ，b F G F ，H G F 等生長因子以及C y c l i n D l 的表達均有變化。與對照組相比，I G F ，b

5、 F G F ，H G F 以及C y c l i n D l的表達均增強。6 、體外培養(yǎng)3 6 h 后，M u l l e r 細胞基本貼壁，伸出突起，并逐漸延長，1 0 d左右細胞匯合，相鄰細胞連接成網(wǎng)狀。顯微鏡下可將細胞分為2 層：底層細胞較大，折光性較弱，多為M u l l e r 細胞；上層細胞折光性強，有立體感，且分支較多，多為各種神經(jīng)元。培養(yǎng)約4 ～5d 左右細胞鋪滿培養(yǎng)瓶底后即可傳代，傳一代約需要5 ～6d 左右。傳2