1、無菌實驗室的要求與日常管理 無菌實驗室的要求與日常管理一、 一、 實驗室設施 實驗室設施開展無菌檢查及微生物限度檢查工作，首先要按照《藥品檢驗所實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》及《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，建立一個布局合理、使用方便、操作安全的無菌室，并且配有完善的實驗設施和管理制度。無菌檢查、微生物限度檢查以及接種室（接種對照菌、菌種傳代）均應嚴格分開，具有危險性的毒株、毒素如破傷風梭菌、黃曲霉毒素的實驗室需單獨使用，以便控制防止傳播。（一）

2、 （一） 潔凈 潔凈實驗室 實驗室1.潔凈室的布局 潔凈室的布局1.1 根據(jù)樣品檢驗要求，一般應至少包括更衣緩沖系統(tǒng)、微生物限度檢查室、無菌檢查室、陽性菌室和物流通道。1.2 更衣系統(tǒng)應至少包括一更（含更鞋） 、二更（含洗手） 、緩沖以及人流走廊等。1.3 物流通道應考慮凈污分流的布局，有條件的可設置污物走廊2.潔凈室的設計要求 潔凈室的設計要求2.1 凈化級別：潔凈走廊、檢查室、陽性菌室應為一萬級；其他房間應為十萬級2.2 氣流組織：

3、陽性菌室對走廊呈負壓，走廊對緩沖有 5Pa 的正壓；陽性菌室全排風2.3 電氣控制：控制開關外置；設置通訊系統(tǒng)3.結構與要求： 結構與要求：無菌潔凈室不宜設在底層，防潮、防霉、采光好，遠離交通干道，廁所及污染區(qū)，面積不超過 10m2，高度不超過 2.4m，由兩個緩沖間、操作間組成。操作間緩沖間之間應有樣品傳遞窗，出入操作間和緩沖間的門不應直對。無菌室內(nèi)應六面光滑平整，無縫隙，不起灰，不落塵，耐腐蝕，易清洗，墻壁與地面、墻壁與天花板連接處

4、應呈凹弧形，操作間不得安裝下水道。無菌室內(nèi)的照明燈應嵌裝在天花板內(nèi)，采光面積要大，光照應分布均勻，光照度不低于 300 勒克斯。緩沖間和操作間應裝有紫外線殺菌燈（2－25w/m3）''用于空氣消毒。紫外線波長 200－300nm 者具有殺菌作用，其中以 265－266nm 殺菌作用最強，這與 DNA 的吸收光譜范圍一致，其殺菌機理可能是在細菌細胞 DNA 中引起胸腺嘧啶雙聚體形成，從而干擾細菌細胞 DNA 復制，導致細菌

5、變異死亡。紫外線殺菌燈 1m 以內(nèi)距離殺菌效果最佳，每次開燈照射時間為 30min。應定期檢查紫外線燈輻射強度，不得低于 70μW·cm-21m 距離。其缺點是穿透力弱，一張紙板可以阻礙光的透過，不能穿透固體物，故只能用作表面消毒及一些不耐熱或化學消毒劑物品的消毒。4.溫度、濕度 溫度、濕度無菌室內(nèi)溫度和相對濕度直接影響紫外殺菌燈的殺菌效果，故溫度最好控制在 25±2℃，相對濕度 40－60％。操作間或凈化工作臺的潔

6、凈空氣應保持對環(huán)境形成正壓，不低于 49Pa。5.操作間 操作間無菌室內(nèi)應安裝空氣除菌過濾層流裝置及調(diào)溫裝置。潔凈度要求：凈化工作臺潔凈度為100 級，無菌室應為 10000 級。操作間應準備乙醇燈（或煤氣燈），火柴，2％碘酊棉球及 75％乙醇棉球、試管架、大小系統(tǒng)進行調(diào)整后，在重新驗證，直至符合規(guī)定才能重新啟用潔凈室。5.2 當溫度、相對濕度和照度等指標出現(xiàn)不符合時，潔凈室可不必停用，但應及時修復空調(diào)系統(tǒng)（或更換照明裝置） ，使其符合

7、規(guī)定。二、實驗室管理： 二、實驗室管理：為保證實驗工作有序進行，實驗室必須制定一系列實驗室管理制度。（一） （一） 實驗室要求： 實驗室要求：1 實驗室環(huán)境應清潔、衛(wèi)生、安靜，實驗室內(nèi)嚴禁吸煙和飲食。2 實驗人員必須穿戴工作衣帽，工作服經(jīng)常洗滌、消毒、保持清潔。3 操作前后或離開實驗室必須用肥皂或消毒液洗手。4 發(fā)生菌液污染臺面或地面，應立即用 3％甲醛或 5％碳酸等消毒液由外向內(nèi)傾覆其上，1小時后再擦拭，如為破傷風梭菌，則應隔夜后再擦

8、洗。5 工作衣、帽、口罩受到菌液污染時，應立即脫下使污染部位包裹在內(nèi)部，高壓滅菌后再清洗。6 如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應先用 75％乙醇棉球擦拭，再浸入 0.1%新潔爾滅消毒液內(nèi)泡手，然后再用肥皂及清水徹底洗干凈。7 接種環(huán)（針），每次使用前后，必須通過火焰滅菌，冷卻后方可接種培養(yǎng)物，接種帶有蠟質(zhì)、油質(zhì)的培養(yǎng)物或菌苔殘留多時，不應立即在火焰上灼燒，應先在內(nèi)焰里將油質(zhì)培養(yǎng)物烘干后再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺污染環(huán)境及感染操作者。8 帶

9、菌的吸管應浸泡在 5％甲酚消毒液內(nèi) 24h 后取出清洗，帶菌的試管或培養(yǎng)物應在 121℃高壓滅菌 30 分鐘后再取出清洗。9 在接種霉菌、放線菌時應在鋪有浸過消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳播。10 廢棄物的處理：a) 必須消除生物危害后，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。b) 污染性銳器（如一次性針頭）應滅菌后處理，注意避免銳器扎傷。c) 污染性可重復使用的材料（如平皿）應滅菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。d) 工

10、作服（含潔凈工作服）應定期清洗，懷疑污染的工作服應滅菌后清洗，潔凈工作服應滅菌后使用。（二） （二） 無菌操作要求： 無菌操作要求：無菌操作是指在無菌的環(huán)境條件下，使用無菌器材，防止微生物污染的操作技術。即保持待檢樣品在操作時不被污染，又要防止被檢的微生物及陽性對照菌在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。從事無菌及微生物操作的工作人員必須經(jīng)過無菌技術及基礎微生物學專業(yè)知識的學習及培訓才具備上崗操作的資格，微生物專業(yè)檢驗人員也不應該頻繁地變換工

11、作崗位。1.無菌室應每次使用前后用 0.1%苯扎溴銨溶液或 2％甲醛液擦拭工作臺面及可能污染的死角，濕拖地面，打開無菌空氣過濾器及超凈工作臺的開關 30 分鐘，紫外線殺菌燈照射1 小時。2.操作人員用肥皂洗手后進入緩沖間換拖鞋，用 75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝?nèi)ヅＦぜ埣巴獍b，從傳遞窗移入操作間，再用 0.1%苯扎溴銨溶液泡手后進入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區(qū)（火焰高度 3－5cm）操作。3 供試品表面消毒，