用于毛細管電泳分離DNA及蛋白質的準互穿聚合物網(wǎng)絡的合成與表征.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、毛細管電泳和微芯片毛細管電泳取代傳統(tǒng)凝膠電泳,使用無交聯(lián)的高分子溶液作為無膠篩分介質,成為一種高效、微量、高靈敏度及自動化的分離分析方法,已在醫(yī)學、法醫(yī)鑒定、農(nóng)業(yè)等領域受到廣泛關注,是分離帶電生物大分子最有效、最廣泛的技術之一。 目前,聚丙烯酰胺是無膠毛細管電泳分離DNA最好的篩分介質,據(jù)報道在55分鐘內可以對1000個堿基DNA進行分離,讀寫準確率高達98%。但是聚丙烯酰胺有兩個主要的缺點:①為了得到更高的DNA讀寫長度,聚丙

2、烯酰胺的分子量一般特別高,因而聚合物溶液的粘度也特別大;②聚丙烯酰胺對毛細管內壁的涂敷能力非常弱,導致毛細管內存在很強的電滲流。在對生物大分子分離時若單獨使用聚丙烯酰胺溶液必須事先對毛細管內壁進行涂敷。合成同時具有自涂敷能力,適宜的粘度,優(yōu)良篩分性能的聚合物是目前用于毛細管電泳分離生物大分子的介質研究中的熱點。但目前合成的均聚物很少同時滿足上述條件,因此,由具有不同性質的單體合成的無規(guī)共聚物、嵌段共聚物、接枝共聚物、共混聚合物、微交聯(lián)納

3、米凝膠聚合物和準互穿聚合物網(wǎng)絡被合成、設計用于分離生物大分子。準互穿網(wǎng)絡結構是由兩種或兩種以上聚合物相互貫穿而形成的聚合物網(wǎng)絡,制備過程一般是首先合成出一種聚合物A,再在聚合物溶液中引發(fā)聚合溶解在溶液中的另一單體B,就地聚合形成準互穿網(wǎng)絡。聚合物形成的網(wǎng)絡能夠減少宏觀相分離,形成的網(wǎng)絡結構比聚合物共混方法形成的網(wǎng)絡更為穩(wěn)定,是目前由不同種類單體合成共聚物的較好的方法。 在這篇論文中,我們合成了一種新的由聚丙烯酰胺與聚N-羥甲基丙

4、烯酰胺構成的準互穿聚合物網(wǎng)絡,這種聚合物網(wǎng)絡同時具有線形聚丙烯酰胺對DNA優(yōu)良的篩分性能和聚N-羥甲基丙烯酰胺對毛細管內壁動態(tài)涂敷的能力。并討論了DNA測序溫度、毛細管內測序電壓和準互穿網(wǎng)絡中聚N-羥甲基丙烯酰胺的含量對DNA測序的影響。用2.5%(w/v)的這種介質在沒有對軟件系統(tǒng)優(yōu)化的情況下75分鐘內對標準DNA的讀寫長度高達1012個堿基對。另外我們還嘗試利用由線性聚丙烯酰胺與聚N,N'-二甲基丙烯酰胺構成的準互穿網(wǎng)絡對毛細管進行

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