1、由于天然的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE，angiotensin-converting enzyme)抑制肽相較于人工合成的降血壓藥，具有食用安全性高、無毒副作用等優(yōu)點，近年來，從不同的天然食品中提取ACE抑制肽成為國內(nèi)外研究的熱點。油茶粕是油茶籽榨完油后的副產(chǎn)物，其中含12～15％的優(yōu)質(zhì)蛋白，油茶粕蛋白中含有7種人體生長發(fā)育所必需的氨基酸。研究表明，油茶粕蛋白除了具有營養(yǎng)價值外，還具有非常重要的生理功能，可作為天然的油茶粕降血壓肽的原材料。

2、本課題以油茶粕為原料，首先采用堿提酸沉法制備油茶粕蛋白，以ACE抑制率為指標(biāo)，利用雙酶復(fù)合水解制備油茶粕多肽，再進(jìn)一步采用超濾、凝膠層析法對油茶粕ACE抑制肽進(jìn)行分離純化，Design-Expert統(tǒng)計分析軟件的響應(yīng)面分析方法得到最優(yōu)的超濾條件，并對最終的ACE抑制肽進(jìn)行穩(wěn)定性研究。結(jié)論如下:
　　實驗測定了不同提油方法所得的5種油茶粕蛋白的基本成分，并對蛋白提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。采用堿提酸沉法提取油茶粕蛋白。5種油茶粕蛋白樣品的等

3、電點pH值存在差異，變化范圍為3.5-4.5，并且冷榨、有機溶劑萃取、水酶浸提后的油茶粕提取蛋白在酸沉?xí)r出現(xiàn)類似兩個等電點的現(xiàn)象。研究結(jié)果表明，采用分段酸沉可提高蛋白質(zhì)沉降率。在經(jīng)正交試驗優(yōu)化堿提工藝條件下，水酶法浸提茶油后的油茶粕蛋白的提取率達(dá)到66.8％
　　從國外引進(jìn)四種蛋白酶，分別為:堿性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutrase)、胃蛋白酶(Pepsin)、胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin)，對其水解

4、后的油茶粕多肽的ACE抑制活性進(jìn)行比較，確定酶解制備油茶粕ACE抑制肽的最優(yōu)方案為:初級酶解的最佳蛋白酶為堿性蛋白酶:加酶量為5000U/g，pH值為8.0，水解溫度50℃。然后調(diào)節(jié)體系，加入4000U/g的胰凝乳蛋白酶進(jìn)行二次酶解，最佳反應(yīng)時間為1h，得到油茶粕多肽的ACE抑制活性為60.4％。
　　在油茶粕ACE抑制肽的分離純化過程中，采用截留分子量分別為10kDa、5Dka、3kDa的中空纖維超濾膜進(jìn)行超濾，分子量低于3kD

5、a的組分的ACE抑制率最高，達(dá)到64.2％，較超濾前有所提高。以ACE抑制率作為指標(biāo)，篩選出用截留分子質(zhì)量為3k的超濾膜作為工作膜，以pH值(A)、超濾溫度(B，℃)、料液質(zhì)量濃度(C，％)作為參試因子，以濾過液的ACE抑制活性為響應(yīng)值，利用Design-Expert統(tǒng)計分析軟件得到了ACE抑制率隨pH值、超濾溫度、料液質(zhì)量濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)回歸模型。優(yōu)化的水解條件為:操作壓力103.42kPa、料液pH值6.66、超濾溫度31.5℃、料液

6、的質(zhì)量濃度5.5％。在此最佳條件下，油茶粕多肽的ACE抑制率模型預(yù)測可達(dá)到79.25％。再將組分采用Sephadex G-25凝膠層析進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，得到四個洗脫峰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，其中組分Ⅲ的ACE抑制率最高，達(dá)到85.2％。
　　對分離純化后的樣品進(jìn)行穩(wěn)定的研究，得到油茶粕ACE抑制肽具有較好的熱穩(wěn)定性、冷藏穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性，并模擬體內(nèi)消化環(huán)境，經(jīng)胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后，其ACE抑制活性維持在70％左右。說明油茶粕AC