1、研究背景和目的:
　　膽囊癌（gallbladder carcinoma，GBC）是最常見的膽道系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率居消化道腫瘤第5位。膽囊癌具有明顯的種族和區(qū)域差異，雖然SEER( Surveillance, Epidemiology, and End Results)評估發(fā)現(xiàn)膽囊癌的發(fā)病率僅2.5/105人次，但近年其發(fā)病率呈明顯增長趨勢，發(fā)展中國家膽囊癌的發(fā)病率可高達15.3/105人次。膽囊癌早期表現(xiàn)無明顯特異性，進展快，

2、可通過直接浸潤、淋巴轉移、血運轉移等進行廣泛擴散，致使早期診斷十分困難，大部分患者發(fā)現(xiàn)膽囊癌時往往已處于中晚期，療效和預后極差，病死率高。手術是目前唯一的可能治愈膽囊癌的方法，但膽囊癌患者放化療不敏感，術后復發(fā)率高，中位生存期僅6個月，5年生存率不足5％。因此，探索膽囊癌的新型化療手段迫在眉睫。
　　廣藿香酮（patchoulenone）是中藥廣藿香的重要組成活性成分之一。具有殺蟲、抗菌、抗炎和免疫調節(jié)等多種生物活性作用。近幾年研

3、究發(fā)現(xiàn)，廣藿香酮在前列腺癌和結腸癌中可通過誘導腫瘤細胞的凋亡和自噬，發(fā)揮較強的抗腫瘤活性，但有關廣藿香酮對膽囊癌的研究目前尚無報道。因此，本研究旨在探討廣藿香酮在體外及體內對人膽囊癌SGC-996細胞增殖、凋亡和周期分布的影響及其可能相關的分子作用機制，為膽囊癌的化療提供新途徑。
　　方法:
　　1、廣藿香酮誘導膽囊癌SGC-996細胞凋亡及周期阻滯
　　通過MTT實驗、克隆形成實驗觀察廣藿香酮對膽囊癌SGC-996細

4、胞體外增殖能力的作用；利用流式細胞儀及Hoechst33342染色分析廣藿香酮對膽囊癌SGC-996細胞凋亡及細胞周期的影響；裸鼠成瘤實驗檢測廣藿香酮在體內對膽囊癌SGC-996細胞的增殖及凋亡的影響。
　　2、廣藿香酮誘導膽囊癌SGC-996細胞凋亡及周期阻滯的分子機制
　　通過Caspase活性實驗探討廣藿香酮誘導膽囊癌SGC-996細胞凋亡的機制；進一步運用Western blotting實驗檢測廣藿香酮作用后，膽囊癌

5、SGC-996細胞凋亡及周期相關蛋白表達水平情況。
　　結果：
　　1、MTT實驗檢測不同濃度廣藿香酮作用不同時間后對膽囊癌SGC-996細胞增殖的影響發(fā)現(xiàn)，廣藿香酮可顯著抑制膽囊癌 SGC-996細胞增殖，且廣藿香酮作用濃度越高，作用時間越長，其抑制作用就越明顯，呈劑量和時間依賴性?？寺⌒纬蓪嶒灆z測發(fā)現(xiàn)，隨著廣藿香酮濃度的增加，膽囊癌SGC-996細胞克隆形成數(shù)目顯著減少。
　　流式細胞儀及Hoechst33342染

6、色分析廣藿香酮對膽囊癌SGC-996細胞凋亡的影響顯示，隨著廣藿香酮作用濃度升高，膽囊癌SGC-996細胞早期凋亡率和晚期凋亡率均顯著增加，并出現(xiàn)典型凋亡形態(tài)改變。我們通過流式細胞儀分析也顯示，廣藿香酮處理后，隨著作用濃度的升高，膽囊癌SGC-996細胞中處于G0/G1期的細胞比例顯著下降，S期細胞比例顯著上升，表現(xiàn)為S期阻滯。裸鼠成瘤實驗發(fā)現(xiàn)，廣藿香酮處理組裸鼠成瘤體積及重量均顯著低于對照組。
　　2、不同濃度廣藿香酮處理后，S

7、GC-996細胞內caspase-9和caspase-3活性升高。在蛋白水平，活化型 caspase-9、活化型caspase-3及剪切型多聚ADP核糖聚合酶1（poly（ADP-ribose）ployrnerase-1，PARP-1）等凋亡相關蛋白表達量及Bax/Bcl-2蛋白比值明顯升高。cyclin D1、cyclin A和cyclin B1等周期相關蛋白表達量明顯下降。
　　結論：
　　廣藿香酮通過調控線粒體凋亡途徑