1、由于化學農藥造成了嚴重的環(huán)境污染，生物農藥越來越受到人們的關注。但是，生物農藥防治效果較慢，使農業(yè)生產承擔了很大的風險。因此，化學農藥與生物農藥復合使用已成為目前植物病害防治的一條新途徑。哈茨木霉（Trichodermaharzianum）是一種優(yōu)良的植物病害防治真菌，由于對苯并咪唑類殺菌劑的高度敏感性，限制了其與殺菌劑的復合使用。因此獲得具有殺菌劑抗性的優(yōu)良菌株，研究抗性菌株與殺菌劑協(xié)同作用防治植物病害，對新型菌藥混配劑的開發(fā)和應用具

2、有重要的理論與實踐意義。
　　使用簡并PCR和反向PCR方法，從哈茨木霉（T.harzianum）基因組DNA中擴增出了α-、β1-、β2-和γ-微管蛋白基因序列。BlastP比對結果顯示，4條基因推測的氨基酸序列與其它真菌的相應氨基酸序列均具有較高的同源性，與粗糙脈孢菌（Neurosporacrassa）的同源性分別達93％、92%、92%和90%。通過序列分析確定了各微管蛋白氨基酸的保守結構域和典型基序的位置，對蛋白的二級結構

3、和三級結構進行了預測。
　　采用PEG-CaCl2介導的原生質體法，成功地將BenR基因轉化到哈茨木霉（T.harzianum）β2-微管蛋白基因位點，獲得了具有多菌靈抗性的菌株。Southernblot分析結果表明，BenR基因已經整合到哈茨木霉（T.harzianum）基因組DNA中，并穩(wěn)定遺傳；抗性水平檢測結果顯示，抗性菌株可以在1500μg/mL的多菌靈濃度下生長，多菌靈抑制菌絲生長的有效中濃度達471.26μg/mL，抑

4、制孢子萌發(fā)的有效中濃度達307.21μg/mL，比原菌株提高了1200倍以上。
　　對哈茨木霉（T.harzianum）抗性菌株的主要生物學特性進行了研究。結果表明，各抗性菌株的最適生長溫度、最適產孢溫度及分生孢子萌發(fā)的適宜溫度均為25℃～30℃；各菌株對pH的適應范圍較廣，但偏酸性條件有利于菌絲生長、分生孢子產生及孢子萌發(fā)；光照對產孢具有明顯的促進作用；在測定的多菌靈濃度下各菌株可以生長、產孢并孢子萌發(fā)，但隨多菌靈濃度的升高逐漸

5、降低；菌株TS1分生孢子產生的最佳固體發(fā)酵條件為：麩皮與秸稈比例為2∶1、培養(yǎng)基含水量為55%、接種量為25%，培養(yǎng)溫度為26℃，在此條件下發(fā)酵產生的分生孢子可達15.42×108個/g；抗性菌株對噻菌靈、苯菌靈和甲基托布津表現(xiàn)正交互抗藥性。
　　通過室內拮抗實驗及室內防效測定，得出以下結論：哈茨木霉（T.harzianum）各抗性菌株抑菌譜廣，對供試的8種植物病原菌均具有一定的抑制作用，其中抗性菌株TS1對水稻立枯病病原尖孢鐮刀

6、菌（Fusariumoxysporum）和立枯絲核菌（Rhizoctoniasolani）菌絲生長抑制率分別達81.34%和86.19%；抗性菌株TS1與多菌靈復合處理對水稻苗期立枯病的室內防效最高，為82.25%，比單獨處理分別提高了22.82%和11.24%。
　　生防真菌對水稻幼苗根部與抗病相關的主要防御酶的誘導研究表明，抗性菌株TS1和多菌靈復合處理的POD、PAL、PPO及SOD活性均高于對照，但除SOD外，各酶活性與用

7、菌株TS1單獨處理時相比無顯著差異，這表明復合處理可以激發(fā)水稻的防衛(wèi)反應，誘導系統(tǒng)獲得抗性，但對酶活的誘導無普遍增效作用；與原菌株相比，哈茨木霉（T.harzianum）抗性菌株TS1對POD、PAL及PPO活性的誘導持續(xù)期延長。
　　研究了抗性菌株TS1與多菌靈復合處理對水稻苗期立枯病的田間防效及菌株TS1在水稻根際的定殖能力。結果表明，3種配比的復合處理對病害防治均具有增效作用，但配比不同增效程度不同，其中6∶4配比增效作用最