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文檔簡介
1、目的:建立體外培養(yǎng)人羊膜上皮細(xì)胞(HAECs)和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞的方法,通過將兩種細(xì)胞共培養(yǎng),觀察并檢測是否能將人羊膜上皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化為結(jié)膜上皮樣細(xì)胞。
方法:①分別采用酶消化法和組織塊法獲得HAECs和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞,并對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察;②將HAECs和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞在Transwell非接觸共培養(yǎng)系統(tǒng)中共培養(yǎng)10天,以誘導(dǎo)HAECs分化;③通過倒置顯微鏡和原子力顯微鏡對誘導(dǎo)前后的HAECs進(jìn)行形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)比較,
2、對誘導(dǎo)前后的HAECs進(jìn)行PAS染色、HE染色,免疫熒光法檢測誘導(dǎo)前后HAECs中CK4、MUC4、MUC5AC的表達(dá),實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測分化細(xì)胞MUC4、MUC5ACmRNA的表達(dá)。
結(jié)果:共培養(yǎng)后的人羊膜上皮細(xì)胞和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞形態(tài)較為相似,誘導(dǎo)后的HAECs中可見少量 PAS陽性細(xì)胞,細(xì)胞免疫熒光法檢測到誘導(dǎo)后HAECs中 CK4、MUC4、MUC5AC呈陽性表達(dá),qRT-PCR檢測到分化后細(xì)胞M
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