鹽脅迫下發(fā)狀念珠藻抗氧化系統(tǒng)及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、發(fā)狀念珠藻,俗稱發(fā)菜,在我國主要分布于西北和北部干旱和半干旱地區(qū),是一種極端環(huán)境下生活的藍(lán)細(xì)菌。由于長期進(jìn)化,發(fā)狀念珠藻具有相應(yīng)的抗紫外、耐旱、耐高溫、耐堿等能力。所以,發(fā)狀念珠藻在我國西部環(huán)境治理和生態(tài)恢復(fù)方面,具有特殊的地位和重要的生態(tài)學(xué)意義。本課題主要研究鹽脅迫下發(fā)狀念珠藻的抗氧化系統(tǒng)及蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的變化。探究了發(fā)狀念珠藻細(xì)胞在活性氧代謝和蛋白質(zhì)、脂質(zhì)代謝方面對鹽脅迫的響應(yīng)機制。研究結(jié)果如下:
  首先,從活性氧代謝的角度,

2、探究發(fā)狀念珠藻活性氧(ROS)及抗氧化系統(tǒng)的動態(tài)變化。結(jié)果表明,發(fā)狀念珠藻細(xì)胞在進(jìn)行不同濃度的氯化鈉處理后,隨著時間的延長,細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子自由基含量先升高后降低,并在NaCl處理第一天時達(dá)到最大,最大值分別為33.31、38.87、44.83、47.94μmol mg-1Dw;而發(fā)狀念珠藻細(xì)胞中過氧化氫隨處理時間延長含量先降低后逐漸上升,并在脅迫處理15天時積累量達(dá)到最大,最大值分別為1.87、1.82、1.58和2.05μmol g

3、-1Dw。發(fā)狀念珠藻細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、抗壞血酸過氧化物酶(APX)、過氧化氫酶(CAT)活性也呈先迅速上升而后下降的趨勢。此外,非酶抗氧化劑含量的變化隨著鹽脅迫處理濃度的不同而變化。氯化鈉濃度越高,發(fā)狀念珠藻細(xì)胞內(nèi)類胡蘿卜素含量越高,當(dāng)氯化鈉濃度為0.8mol/L時,類胡蘿卜素含量達(dá)到1.2326μg/mgDw。
  其次,在蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)方面,通過比較發(fā)狀念珠藻細(xì)胞蛋白質(zhì)的提取方法,選擇出適合SDS-PAGE電泳的最優(yōu)

4、條件。為了提高SDS-PAGE圖譜的分辨率,對電泳過程中的分離膠濃度、電壓、電流、上樣量等進(jìn)行研究,建立發(fā)狀念珠藻細(xì)胞電泳條件??偟鞍椎奶崛〔捎帽恋矸?,上樣量為45μg,分離膠濃度為12%,分離膠電流在20mA以下,恒定電壓,考馬斯亮藍(lán)染色,發(fā)狀念珠藻蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳圖譜上蛋白條帶數(shù)量約13條,條帶清晰。應(yīng)用上述電泳條件,對鹽脅迫后的發(fā)狀念珠藻細(xì)胞蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE,發(fā)狀念珠藻在0.8mol/LNaCl脅迫第一天后

5、,所誘導(dǎo)的蛋白種類及含量最多,其中88.76kDa,49kDa,35.89kDa蛋白被明顯誘導(dǎo),而30.6kDa蛋白被明顯抑制。0.8mol/LNaCl鹽脅迫7天和15天時58kDa含量明顯增加。發(fā)狀念珠藻在鹽脅迫條件下誘導(dǎo)表達(dá)的88.76kDa,58kDa,49kDa,35.89kDa蛋白與發(fā)狀念珠藻的抗逆機制可能有一定的聯(lián)系。
  最后,在脂質(zhì)代謝方面,探究了鹽脅迫前后發(fā)狀念珠藻細(xì)胞中糖脂、磷脂及脂肪酸組成及其含量的變化。結(jié)果

6、表明,鹽脅迫處理的發(fā)狀念珠藻細(xì)胞中飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸含量分別占37.23%、22%,鹽脅迫后的發(fā)狀念珠藻不飽和脂肪酸(C16:1、C18:1)含量增加,而鹽脅迫后發(fā)狀念珠藻細(xì)胞中多不飽和脂肪酸(C18:2)含量降低,不飽和脂肪酸能保持細(xì)胞膜的相對流動性,以保證細(xì)胞的正常生理功能,以提高發(fā)狀念珠藻細(xì)胞對鹽脅迫的耐受性。此外,GC-MS分析中發(fā)現(xiàn)了葉綠醇,葉綠醇是葉綠素的組成部分,葉綠醇的相對含量降低,從側(cè)面說明鹽脅迫對葉綠素 a具有

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