1、第一部分人退變髓核組織來源間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
　　目的：體外分離、培養(yǎng)及鑒定人退變髓核組織來源的間充質干細胞（NP-MSCs）并觀察其生物學特性。方法：收集10例腰椎間盤退行性疾病患者的髓核手術標本，采用0.05％II型膠原酶消化加貼壁法分離髓核間充質干細胞并體外培養(yǎng)和擴增。用倒置相差顯微鏡觀察人髓核間充質干細胞形態(tài)、流式細胞儀檢測干細胞表型分子、定向誘導人髓核間充質干細胞成脂、成骨及成軟骨分化。結果：采用0.05％I

2、I型膠原酶37℃消化4小時（h）即可從組織標本中分離出人髓核間充質干細胞。人髓核間充質干細胞原代培養(yǎng)3天可見細胞貼壁，30天左右達到80％融合，傳至第3代后，細胞形態(tài)轉變成均一的長梭形或紡錘形，呈漩渦狀排列。流式細胞儀檢測人髓核間充質干細胞高表達CD29和CD105，不表達或低表達CD34、CD45及HLA-DR。多向誘導21天（d）后，成骨誘導組Alizareen染色和成軟骨誘導組Safranin’O染色呈陽性，成脂誘導組油紅O染色陰

3、性。結論：采用0.05%II型膠原酶消化結合貼壁法可從人退變髓核組織中提取具有多向分化潛能的間充質干細胞。
　　第二部分低氧對人髓核組織來源間充質干細胞向類髓核細胞分化的生物學誘導效應
　　目的：探索低氧對人退變髓核組織來源的間充質干細胞（NP-MSCs）向類髓核細胞定向分化的生物學效應。方法：在5%氧濃度下，用含轉化生長因子-β3（TGF-β3）誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)人髓核間充質干細胞，同時設立在21%氧濃度下誘導培養(yǎng)為對照組。誘

4、導培養(yǎng)第7天（d）和14d，實時熒光定量 PCR（Realtime-PCR）檢測低氧誘導因子-1α（HIF-1α)、SOX-9、Aggrecan和II型膠原基因的表達，誘導培養(yǎng)1采4d用，獨采立用樣免本疫熒光法檢測低氧誘導組與常氧誘導組細胞II型膠原的表達。組間比較t檢驗。結果：NP-MSCs誘導培養(yǎng)第7d時低氧組HIF-1α與SOX-9基因的相對表達量高于常氧組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但 Aggrecan和 II型膠原基