1、目的:
　　1.分離、培養(yǎng)擴(kuò)增和鑒定兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）。
　　2.通過體外誘導(dǎo)BMSCs成類髓核細(xì)胞，尋找細(xì)胞體內(nèi)移植的合適時(shí)間點(diǎn)。
　　方法:
　　應(yīng)用單純貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增兔BMSCs和髓核細(xì)胞，并應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測BMSCs表面相對(duì)特異性分子(CD90、CD44、CD45、CD34)的表達(dá)率以鑒定BMSCs；將接種有BMSCs的Transwell小室置于含有髓核細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，建

2、立共培養(yǎng)模型；制定誘導(dǎo)BMSCs生長曲線，用RT-PCR（reverse transcription PCR）和Western blot檢測其表達(dá)蛋白聚糖和Ⅱ型膠原，結(jié)合以上檢測尋找最佳共培養(yǎng)時(shí)間，為椎間盤組織工程種子細(xì)胞的更深入研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:
　　應(yīng)用貼壁培養(yǎng)法成功分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增兔BMSCs和髓核細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測BMSCs表面相對(duì)特異性分子的陽性表達(dá)率顯示：CD90為91.2％，CD44為93.5%

3、，CD45為4.4%，CD34為5.5%。在共培養(yǎng)模型中，經(jīng)細(xì)胞生長曲線檢測、RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果提示BMSCs與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)可誘導(dǎo)BMSCs表達(dá)蛋白聚糖和Ⅱ型膠原，在三代以內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)細(xì)胞生長曲線無明顯改變，結(jié)合以上檢測認(rèn)為細(xì)胞共培養(yǎng)15天左右達(dá)到最佳狀態(tài)，適合進(jìn)行體內(nèi)移植。
　　結(jié)論:
　　1.采用單純貼壁法可以成功分離出純度較高的BMSCs；
　　2.在Transwe ll小室和培養(yǎng)皿構(gòu)成