1、哮喘是一種氣道的慢性炎癥性疾病，由氣道自身結(jié)構(gòu)細(xì)胞和炎癥細(xì)胞及其細(xì)胞組分共同參與。哮喘患者氣道反復(fù)炎癥以及持續(xù)重塑促進(jìn)了不可逆性的肺功能下降，增加了對(duì)當(dāng)前哮喘治療藥物的抵抗。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為Th2占優(yōu)勢(shì)適應(yīng)性免疫應(yīng)答在哮喘發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-5及IL-13等與其靶細(xì)胞相互作用導(dǎo)致哮喘典型病理生理改變；其中IL-13在哮喘的氣道炎癥、氣道高反應(yīng)以及重塑中的作用已經(jīng)得到肯定，機(jī)制也日趨明確。但目前臨床上有關(guān)靶向

2、阻斷IL-13的哮喘治療策略并沒有明確獲益。究其原因，一方面，Th2類細(xì)胞因子的功能效應(yīng)間存在相互代償；另一方面，適應(yīng)性免疫應(yīng)答與固有免疫應(yīng)答之間存在復(fù)雜的交互。氣道上皮層不僅作為結(jié)構(gòu)屏障，其還可以對(duì)環(huán)境刺激做出應(yīng)答，分泌相應(yīng)的炎癥介質(zhì)IL-25、IL-33和TSLP等，激活粘膜周圍ILC2細(xì)胞進(jìn)而導(dǎo)致哮喘的發(fā)生發(fā)展。固有免疫應(yīng)答作用的發(fā)現(xiàn)為哮喘基于肺部的發(fā)病機(jī)制與Th2型炎癥提供了一個(gè)緊密的聯(lián)系；并一定程度解釋了靶向阻斷以Th2為中心

3、的適應(yīng)性免疫應(yīng)答并不能最大臨床獲益的原因。盡管IL-25、IL-33和TS LP均能誘導(dǎo)哮喘的發(fā)生，IL-33主要病毒相關(guān)疾病中高表達(dá)、TS LP主要在毒性疾?。ㄈ缥鼰煟└弑磉_(dá)，而IL-25在變應(yīng)性哮喘中表達(dá)較高，且IL-25可以促進(jìn)IL-33以及TS LP在肺部的表達(dá)，說明IL-25在變應(yīng)性哮喘中的作用更為突出?；诖耍覀?cè)O(shè)想聯(lián)合阻斷適應(yīng)性及固有免疫應(yīng)答的關(guān)鍵因子IL-13和IL-25，可能會(huì)更好的下調(diào)哮喘的氣道炎癥和氣道重塑。為此

4、，進(jìn)行了以下研究：
　　方法：
　　1.OVA誘導(dǎo)哮喘小鼠模型，BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)，HE染色、Masson染色觀察模型制備情況。
　　2.Real-Time PCR檢測(cè)哮喘模型小鼠肺組織IL-13和IL-25 mRNA的表達(dá)情況，ELISA檢測(cè)BALF中IL-13和IL-25的蛋白表達(dá)水平，免疫組化染色對(duì)肺組織IL-13和IL-25進(jìn)行定位。
　　3.應(yīng)用sIL-13R和sIL-25R靶向拮抗哮喘小鼠IL-13和

5、IL-25后，BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)，肺組織HE染色，觀察氣道炎癥的變化。以Mch誘導(dǎo)各組小鼠，觀察氣道高反應(yīng)的變化。
　　4.聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25后，ELISA檢測(cè)BALF以及肺組織勻漿中Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-13表達(dá)水平，以及固有免疫細(xì)胞因子IL-25、IL-33和TSLP的表達(dá)水平。
　　5.肺組織PAS染色，ELISA檢測(cè)BALF及肺組織中MUC5AC糖蛋白表達(dá)水平，來反映聯(lián)合拮抗IL-13

6、和IL-25后氣道杯狀細(xì)胞的化生和黏液分泌狀態(tài)。
　　6.天狼星紅染色、膠原檢測(cè)來觀察支氣管周圍纖維化情況；Western blotting檢測(cè)TGF-β1，Smad2以及p-Smad2的蛋白水平，分析拮抗IL-13和IL-25抑制膠原產(chǎn)生的機(jī)制。
　　7.抗α-SMA和PCNA免疫組化染色，觀察聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞肥大和增殖的影響。
　　8.抗vWF免疫組化染色，ELISA檢測(cè) BALF及肺

7、組織VEGF表達(dá)水平，觀察聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25對(duì)肺組織新生血管的影響。
　　結(jié)果：
　　1.OVA成功誘導(dǎo)哮喘小鼠模型產(chǎn)生，哮喘模型BALF中嗜酸細(xì)胞增高、肺組織炎癥浸潤(rùn)明顯、氣道周圍纖維化顯著。哮喘模型IL-13和IL-25的mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著上調(diào)。
　　2.應(yīng)用sIL-13R和sIL-25R靶向拮抗哮喘小鼠IL-13和IL-25后，BALF中嗜酸細(xì)胞顯著減少，肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，哮喘小鼠

8、氣道高反應(yīng)明顯控制。
　　3.聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25后，BALF及肺組織勻漿中Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-13以及固有免疫細(xì)胞因子IL-25、IL-33和TSLP的表達(dá)水平均顯著下降。
　　4.聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25后，哮喘小鼠MUC5AC糖蛋白表達(dá)明顯抑制，氣道PAS評(píng)分及杯狀細(xì)胞area/Pbm比例明顯下降。
　　5.聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25后，TGF-β1及p-Smad2的蛋白

9、水平明顯下調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致氣道周圍膠原的堆積明顯減輕。
　　6.抗α-SMA和PCNA免疫組化染色結(jié)果顯示，聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25后氣道平滑肌細(xì)胞肥大和增殖明顯受到抑制。
　　7.聯(lián)合拮抗IL-13和IL-25后，VEGF表達(dá)水平明顯下調(diào)，抗vWF陽(yáng)性血管明顯減少。
　　結(jié)論：
　　1.用OVA致敏和激發(fā)成功構(gòu)建哮喘小鼠模型，該模型中IL-13及IL-25的mRNA及蛋白水平均顯著高于正常對(duì)照小鼠。