1、目的：腹瀉病是常見病、多發(fā)病，全球每年死于腹瀉相關疾病或其并發(fā)癥的兒童達上百萬。腹瀉病毒的感染是腹瀉病的主要病因，而導致病毒性腹瀉的病毒主要有札如病毒、A組輪狀病毒、B組輪狀病毒、星狀病毒、I型諾如病毒、Ⅱ型諾如病毒、腸道腺病毒。腹瀉病毒具有潛伏期短、傳染性強、易爆發(fā)等特點，而且目前尚無特效的藥物對抗腹瀉病毒，因此快速準確地檢測病毒在腹瀉病的治療和預防上顯得尤為重要。目前腹瀉病毒的檢測方法主要有電鏡法、免疫學檢測、PCR法等，但這些方法

2、均無法達到高通量的檢測。本文旨在建立一種7種腹瀉病毒化學發(fā)光基因芯片檢測方法，該芯片能夠同時檢測7種腹瀉病毒，大大縮短了檢測時間，增加了檢測通量，提高了檢測效率，為腹瀉病毒的檢測提供一種新的高通量檢測手段。
　　方法：1、調(diào)研文獻確定本研究擬檢測的病原體及病原體靶基因。2、收集病原體樣本，對無臨床樣本的 B組輪狀病毒，通過人工合成其靶基因。3、利用Clustalx1.8.msw Alignmen、Primer5.0等生物學軟件設計

3、引物與探針，并合成、篩選特異的引物與探針。4、優(yōu)化多重RT-PCR體系。5、制備質(zhì)粒參考品、體外轉(zhuǎn)錄RNA參考品，在優(yōu)化好的多重RT-PCR體系和芯片雜交條件下，評價芯片的特異性、靈敏度、重復性，檢測100例臨床樣本，評價芯片的實用性。
　　結果：1、調(diào)研文獻確定擬檢測的7種腹瀉病毒，札如病毒、A組輪狀病毒、B組輪狀病毒、I型諾如病毒、Ⅱ型諾如病毒、星狀病毒、腸道腺病毒及其靶基因。2、共篩選出7對特異性引物和12條特異性探針。3、

4、完成7種腹瀉病毒質(zhì)粒參考品的構建，并以質(zhì)粒參考品為模板，構建了7種腹瀉病毒體外轉(zhuǎn)錄RNA參考品。4、為了保證每個靶基因在多重RT-PCR體系中的擴增效率，針對體系引物組合、引物濃度配比等條件對多重RT-PCR體系進行了優(yōu)化。最終分為A、B兩組多重RT-PCR體系，建立了腹瀉病毒化學發(fā)光基因芯片檢測方法。5、為驗證方法的可靠性，以制備好的體外轉(zhuǎn)錄RNA參考品為模板，在優(yōu)化好的RT-PCR體系和芯片雜交條件下對該芯片的特異性、靈敏度和重復性

5、進行考核。結果顯示，該芯片檢測體外轉(zhuǎn)錄RNA參考品的靈敏度為3.0×103copies/μl；特異性良好，無交叉現(xiàn)象，能很好的區(qū)分上述7種腹瀉病毒。檢測100例臨床樣本的靈敏度為95.2％、特異性為92.1%、符合率為95.1%。
　　結論：本文建立了一種腹瀉病毒化學發(fā)光基因芯片檢測方法，利用該方法能夠同時檢測7種腹瀉病毒。芯片性能考核結果顯示，該芯片的特異性、靈敏度和重復性均達到預期的性能要求。該方法的建立為腹瀉病毒的臨床診斷和