1、microRNA(Micro ribonucleic acids，miRNAs)是真核生物中普遍存在的一類長約19-25 nt的內(nèi)源性非編碼小RNA，能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)。作為一類表達(dá)具有時序性和組織特異性的進(jìn)化上相對保守的調(diào)節(jié)者，microRNA在生物體的許多生理代謝過程中都發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，如細(xì)胞增殖、器官發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和響應(yīng)脅迫等。赤潮是一種全球性的生態(tài)異常現(xiàn)象和自然災(zāi)害，給人類生產(chǎn)、生活和生態(tài)環(huán)境都來了嚴(yán)重的損害

2、。隨著海洋環(huán)境污染的逐漸加重，赤潮的發(fā)生次數(shù)、危害面積及帶來的損害越來越大，因此，全球的研究者都為赤潮的發(fā)生機(jī)理和防治付出了很多的努力。甲藻是一類重要的赤潮生物，研究者已在生理生態(tài)方面對甲藻做了很多研究，但赤潮生物爆發(fā)性增殖的分子機(jī)理研究的相對較少。鏈狀亞歷山大藻是一種全球分布的能產(chǎn)生麻痹性貝毒毒素的典型甲藻，本文利用高通量測序技術(shù)對該藻延遲期和對數(shù)期兩個文庫進(jìn)行了測序，共得到38，092，056和32，969，156條raw read

3、s，發(fā)現(xiàn)88個已知的microRNA，可歸為32個家族，得到15個新穎的microRNA以及83個microRNA前體。其中在兩個不同的生長時期有12差異表達(dá)的microRNA。通過12個差異表達(dá)microRNA的靶基因預(yù)測，我們共得到了1813個靶基因，并對其進(jìn)行了GO注釋和KEGG功能注釋。osa-miR2876、rgl-miR5139、aca-miR-3p-456915和ae-miR159a均參與DNA復(fù)制或細(xì)胞快速生長代謝相關(guān)的

4、途徑的調(diào)控，如:細(xì)胞周期，嘌呤、嘧啶的代謝，錯配修復(fù)等。同時rgl-miR5139與藻細(xì)胞的吞噬作用相關(guān)，也為甲藻的兼性營養(yǎng)能力提供了證據(jù)。
　　此外，從鏈狀亞歷山大藻(Alexandrium catenella)延遲期、對數(shù)期兩個小RNA文庫中選擇了四個差異表達(dá)的與該藻快速生長調(diào)控相關(guān)的microRNA(osa-miR2876、rgl-miR5139、aca-miR-3p-456915和ae-miR159a)，設(shè)計f/2培養(yǎng)下延

5、遲期、對數(shù)期和高氮、高磷、高錳對數(shù)期五個條件，以5.8srRNA為內(nèi)參基因，以SYBR GreenⅠ為熒光染料，用加尾法熒光定量PCR對其相對表達(dá)量進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明:osa-miR2876、rgl-miR5139、aca-miR456915-3p均在延遲期有最高的表達(dá)量，osa-miR2876、 rgl-miR5139在延遲期的表達(dá)量顯著高于f/2對數(shù)期和誘導(dǎo)對數(shù)期，與高通量測序結(jié)果是一致的;aca-miR456915-3p在延遲期

6、的表達(dá)量與f/2對數(shù)期的表達(dá)量相當(dāng)，高通量測序得到的延遲期的表達(dá)量是對數(shù)期的1.21倍，實(shí)驗結(jié)果與測序結(jié)果基本一致。tae-miR159a在對數(shù)期及誘導(dǎo)對數(shù)期的表達(dá)量均顯著高于延遲期，這與測序結(jié)果是一致的。
　　通過對microRNA數(shù)據(jù)中得到的與該藻生長調(diào)控相關(guān)的四個microRNA進(jìn)行克隆測序，確定了序列信息的正確性。并通過設(shè)置不同的培養(yǎng)條件，對其表達(dá)進(jìn)行分析，進(jìn)一步證明了microRNA在甲藻中的表達(dá)以及在鏈狀亞歷山大藻中的