1、目的：研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cells, Tregs）對(duì)NK細(xì)胞腫瘤殺傷力的影響及Treg細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫抑制的機(jī)制；初步探討過繼輸注NK細(xì)胞逆轉(zhuǎn)Treg細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫抑制的作用。
　　方法：免疫磁珠分離法（MACS）分離得小鼠脾臟Treg細(xì)胞及NK細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其純度。以 CD3/CD28單克隆抗體磁珠和重組小鼠白介素2（rmIL-2）聯(lián)合刺激體外擴(kuò)增Treg細(xì)胞，重組小

2、鼠白介素15（rmIL-15）、rmIL-2以及氫化可的松聯(lián)合刺激體外擴(kuò)增NK細(xì)胞。將擴(kuò)增后Treg細(xì)胞及NK細(xì)胞按不同比例混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，MTT比色法檢測(cè) NK細(xì)胞的殺傷活性。如之前研究中所報(bào)道的方法將B16-F10小鼠黑色瘤細(xì)胞細(xì)胞輸注至 Balb/c小鼠體內(nèi)建立肺移植瘤模型[1]，將荷瘤小鼠分為4組：A組）單獨(dú)接種B16-F10小鼠黑色瘤細(xì)胞；B組）Treg細(xì)胞+B16-F10黑色素瘤細(xì)胞； C組）B16-F10黑色素瘤細(xì)胞+N

3、K細(xì)胞；D組）Treg細(xì)胞+B16-F10黑色素瘤細(xì)胞+NK細(xì)胞。MTT比色法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組小鼠脾臟 NK細(xì)胞的殺傷活性，并比較不同處理組小鼠肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目。
　　結(jié)果：體外擴(kuò)增后的Treg細(xì)胞對(duì)新鮮分選及擴(kuò)增后的NK細(xì)胞活性均具有明顯抑制作用（p＜0.05），且抑制作用呈劑量依賴關(guān)系；A組荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性低于正常小鼠，且B組荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性較A組進(jìn)一步降低（p＜0.05）；D組荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性高于A組和B組荷瘤小鼠，

4、但仍低于正常小鼠組（p＜0.05）。B組荷瘤小鼠肺部移植瘤數(shù)目（105.33±10.97）較 A組明顯增多（17±4.58）（p＜0.01）;C組荷瘤小鼠肺部移植瘤數(shù)目（2.00±1.00）較A組（17±4.58）明顯減少（p=0.037）；D組荷瘤小鼠肺移植瘤數(shù)目（79.00±8.54）較 B組明顯降低（105.33±10.97）（p=0.030），但仍高于A組荷瘤小鼠（17±4.58）（p＜0.001）。
　　結(jié)論：體內(nèi)種植腫