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![用慢病毒載體作為模型研究具有保護內含子作用的元件.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/12/bb4fdf31-c861-4bc4-a306-8015acb4aa42/bb4fdf31-c861-4bc4-a306-8015acb4aa421.gif)
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文檔簡介
1、在I型獲得性免疫缺陷病毒(HIV-1)的生命周期中,病毒通過不同的剪接方式產生了40多種不同類型的mRNA,這些mRNA翻譯出的功能蛋白能將完整的轉錄本重新包裝成新的病毒。例如,Rev蛋白將完整長度的或是單一剪接的轉錄本轉運出核。因此,必然存在一種協(xié)同的機制調控和保護著內含子的剪接。為了證實這一假設,我們利用帶有內含子的慢病毒載體質粒制備了假病毒,并以此制備了病毒介導的轉基因小鼠。我們發(fā)現(xiàn),在這假病毒和轉基因小鼠中均有內含子存在的現(xiàn)象。
2、這激勵我們嘗試在CMV啟動子與帶有內含子DNA間插入一段病毒功能性片段構建了一系列載體,然后在添加與不加Rev質粒的情況下轉染入293T細胞。通過提取細胞RNA,逆轉錄,實時熒光定量PCR的方法獲得含有內含子的轉錄本與全部轉錄本的比值(I/E),并以此衡量病毒片段對內含子的保護能力。我們的結果表明Leader(包含了剪接功能域1和包裝信號的片段)在與Rev共作用時,其I/E的比值達到90%左右。而刪除了Leader的病毒質粒,則失去了保
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