1、目的:本課題旨在通過(guò)建立擬交感心房顫動(dòng)模型，研究心房縫隙連接蛋白43(Cx43)表達(dá)水平及分布的變化，從而探討交感性房顫發(fā)生與維持的可能的內(nèi)在機(jī)制。
　　方法:建立交感性心房顫動(dòng)模型，健康幼犬15只，雌雄不分，將其隨機(jī)分成3組，每組5只，分別為:1.對(duì)照組（Control組），將實(shí)驗(yàn)犬心臟取出后，快速連接至langendorff心臟離體灌流儀，予臺(tái)氏液灌流，持續(xù)約1h?？焖傩姆科鸩M（RAP組），灌流方法同Control組，僅在灌

2、流時(shí)用電生理刺激儀以800次/min頻率起搏30s，共30次。異丙腎上腺素灌流組+快速心房起搏組(ISO+RAP組)，以含0.1 umol/L異丙腎上腺素(ISO)的改良臺(tái)氏液灌流心臟，余同RAP組。①在離體灌流狀態(tài)下，通過(guò)快速心房起搏構(gòu)建擬交感性房顫模型。各組分別測(cè)量心房有效不應(yīng)期(AERP)和記錄各組的房顫誘發(fā)率的情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取左心房組織固定，通過(guò)免疫組化檢測(cè)心房神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和酪氨酸羥化酶(TH)的表達(dá)和分布變化。觀

3、察擬交感效應(yīng)對(duì)快速起搏離體心臟的影響。②取部分左心房組織，采用western blotting方法檢測(cè)各組心房肌中總Cx43的含量及磷酸化Cx43的含量，Q-PCR檢測(cè)Cx43mRNA表達(dá)量，免疫熒光(IF)檢測(cè)心房肌組織Cx43的分布變化，凋亡試劑盒檢測(cè)心房肌組織的細(xì)胞凋亡率，透射電鏡檢測(cè)心房肌線粒體形態(tài)的變化，熒光比色法檢測(cè)心房肌線粒體ROS的生成量。
　　結(jié)果:
　　①各組所測(cè)得的AERP中，Control組和RAP組

4、無(wú)顯著差別，ISO+RAP組AERP則顯著縮短; ISO+RAP組可成功誘發(fā)房顫，而Control組及RAP組均無(wú)法誘發(fā)房顫;與Control組比較，RAP組及ISO+RAP組NGF和TH的含量及分布均增多，ISO+RAP組高于RAP組。
　?、谂cControl組比較，RAP組及ISO+RAP組Cx43及磷酸化Cx43含量呈逐漸降低趨勢(shì);與Control組比較，RAP組Cx43分布呈明顯側(cè)向化，線粒體輕度腫脹，基質(zhì)完整，ISO+R

5、AP組Cx43呈點(diǎn)狀散在分布，線粒體明顯腫脹，部分基質(zhì)透明; ISO+ RAP組細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)及線粒體ROS生成量均顯著高于RAP組及Control組，而RAP組則高于Control組。
　　結(jié)論:
　　1.通過(guò)異丙腎上腺素灌流模擬交感神經(jīng)興奮效應(yīng)，可以顯著縮短心房肌的動(dòng)作電位時(shí)程，表現(xiàn)為AERP時(shí)程縮短。
　　2.單純的高頻心房起搏在本實(shí)驗(yàn)持續(xù)的時(shí)間內(nèi)無(wú)法誘發(fā)房顫，而在擬交感效應(yīng)下則可以成功誘發(fā)，成功構(gòu)建擬交感