1、研究背景和目的:
　　當(dāng)前脂肪來(lái)源干細(xì)胞(ASCs)的應(yīng)用已經(jīng)擴(kuò)展至臨床諸多領(lǐng)域，最為盛行的是應(yīng)用于整形外科領(lǐng)域的脂肪移植，然而，該法卻始終面臨著一些臨床應(yīng)用的困境，例如分離流程復(fù)雜、需要引入外源的、異種的酶蛋白消化組織等等。傳統(tǒng)的化學(xué)消化法所分離獲得基質(zhì)血管片段(SVF)為細(xì)胞懸液，并非黏附在細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)上的生理狀態(tài)，所以移植后ASCs易被宿主巨噬細(xì)胞吞噬，使成熟脂肪細(xì)胞和ASCs均不能長(zhǎng)久成活，這是導(dǎo)致脂肪移植保留率不

2、穩(wěn)定的主要原因。2013年納米脂肪(Nanofat)的問(wèn)世給了我們很大的啟示，該法是通過(guò)物理方法將脂肪組織處理成一種近似干細(xì)胞懸液的狀態(tài)，以此進(jìn)行真皮內(nèi)注射，達(dá)到干細(xì)胞療法的效果。雖然Nanofat選擇性破壞了脂肪細(xì)胞，達(dá)到了可通過(guò)銳針注射的目的，但由于其含有大量腫脹液及脂滴成分，最主要的SVF細(xì)胞濃度甚至低于普通脂肪組織，因此無(wú)法達(dá)到干細(xì)胞療法的要求。能否通過(guò)純物理手段獲取高濃度SVF/ASC細(xì)胞的同時(shí)，又最大程度獲得起保護(hù)作用的EC

3、M呢？故本研究目的在于通過(guò)對(duì)Nanofat進(jìn)一步的處理，提取一種富集SVF細(xì)胞和ECM的高濃度產(chǎn)物，以提高脂肪移植的成活率和穩(wěn)定性，特命名為脂肪來(lái)源干細(xì)胞基質(zhì)膠ECM/SVF-gel。實(shí)驗(yàn)分為以下幾個(gè)方面:
　　1) ECM/SVF-gel的定義及標(biāo)準(zhǔn)制備流程的確定;
　　2) ECM/SVF-gel中各細(xì)胞亞群成分分析;
　　3) ECM/SVF-gel作為干細(xì)胞療法促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究;
　　4) ECM/

4、SVF-gel作為高保留率的組織移植材料，移植后的結(jié)構(gòu)變化;
　　5) ECM/SVF-gel的臨床應(yīng)用。
　　方法與實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　將抽吸獲得的脂肪組織進(jìn)行不同時(shí)間的機(jī)械力處理、去油，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示所獲得的ECM/SVF-gel，在處理1分鐘后，體積基本穩(wěn)定，脂肪組織的脫油率在85％至90％。我們將脂肪組織從抽吸到制成Nanofat再到ECM/SVF-gel，制定出標(biāo)準(zhǔn)化流程，其中運(yùn)用流體渦旋以及絮凝沉淀的物理學(xué)原理，

5、最終獲得ECM/SVF-gel的濃縮脂肪組織。ECM/SVF-gel呈膠凍狀，可通過(guò)27g銳針進(jìn)行皮內(nèi)注射，與脂肪抽吸物相比質(zhì)地更為均勻。ECM/SVF-gel的電鏡觀(guān)察，可見(jiàn)其中含有大量的ECM成分，并且短時(shí)間內(nèi)隨著物理處理時(shí)間的延長(zhǎng)，ECM結(jié)構(gòu)基本保持完整。免疫熒光共聚焦結(jié)果以及流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，ECM/SVF-gel與正常脂肪組織以及Nanofat相比，去除了絕大多數(shù)的成熟脂肪細(xì)胞和油脂，保留大量的血管片段、細(xì)胞外基質(zhì)，SVF

6、細(xì)胞數(shù)量達(dá)到了正常脂肪組織的4～5倍，而CD34+細(xì)胞達(dá)到了處理前的6倍。將提取的SVF細(xì)胞貼壁培養(yǎng)，進(jìn)行成脂、成骨以及成軟骨分化誘導(dǎo)，結(jié)果顯示，物理處理后存活的干細(xì)胞并未受到機(jī)械力的影響，依然具有多向分化能力。將ECM/SVF-gel應(yīng)用于動(dòng)物創(chuàng)面愈合模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，較單純注射SVF組，ECM/SVF-gel對(duì)促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用更加明顯。將新鮮制備的hECM/SVF-gel移植至裸鼠背部皮下，在移植后兩周、四周以及更長(zhǎng)的3個(gè)月時(shí)間點(diǎn)

7、觀(guān)察，ECM/SVF-gel移植后保留率非常穩(wěn)定，遠(yuǎn)期保留率高于80％。移植物組織切片觀(guān)察，ECM/SVF-gel移植后組織內(nèi)空洞及壞死組織明顯少于普通脂肪移植組。移植后14天，組織內(nèi)出現(xiàn)大量小細(xì)胞，并在移植一個(gè)月后即可觀(guān)察到均一的脂肪細(xì)胞，而普通脂肪移植后則出現(xiàn)明顯組織壞死、纖維化結(jié)構(gòu)以及較大空泡。同步進(jìn)行的臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，ECM/SVF-gel對(duì)于頸部皺紋、面部凹陷以及局部皮膚色素沉著等衰老性表現(xiàn)的治療作用十分顯著。
　　結(jié)

8、論:
　　1、ECM/SVF-gel是自體脂肪組織經(jīng)純物理方法處理后獲得的、由高濃度生物活性細(xì)胞外基質(zhì)ECM、脂肪來(lái)源干細(xì)胞ASCs構(gòu)成的、可注射的凝膠狀脂肪移植材料。
　　2、按照本課題組制定的標(biāo)準(zhǔn)流程制備出的ECM/SVF-gel中，SVF細(xì)胞仍處于粘附在ECM上的正常生理狀態(tài)，二者均保留了相對(duì)完整性和生物活性。
　　3、ECM/SVF-gel促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用優(yōu)于SVF細(xì)胞懸液，其在干細(xì)胞療法領(lǐng)域的應(yīng)用前景廣闊。