1、目的：
　　探討CerS2基因過表達對甲狀腺乳頭狀癌BCPAP細胞生長、增殖的影響。
　　方法：
　　1）采用pAdxsi重組腺病毒骨架載體構建人源重組CerS2腺病毒表達載體，并確認pAdxsi-CerS2-GFP腺病毒表達載體對BCPAP細胞株感染的最佳感染復數(shù)（MOI）、過表達高峰時間；
　　2）將pAdxsi-GFP、pAdxsi- CerS2-GFP腺病毒表達載體分別感染BCPAP細胞，培養(yǎng)特定時間后，

2、分別提取空白組（blank group）、空載組（pAdxsi-GFP）、實驗組（pAdxsi-CerS2-GFP）細胞總RNA與總蛋白，實時熒光定量聚合酶鏈反應（Q-PCR）、蛋白質(zhì)印跡法（WB）檢測各組細胞中CerS2 mRNA、蛋白表達水平；
　　3）噻唑藍比色法（MTT）檢測CerS2基因不同作用時間對各組細胞體外增殖的影響；
　　4）流式細胞術PI法分析各組細胞周期變化；
　　5）Annexin V-APC/

3、7-AAD雙染法檢測各組細胞凋亡。
　　結果：
　　1）經(jīng)酶切、測序鑒定，克隆片段大小、序列與NM_022075一致，其感染BCPAP細胞最佳MOI值為240，最佳作用時間48h；
　　2）Q-PCR、WB結果提示實驗組細胞CerS2 mRNA在24h、48h、72h相對表達量依次為空白組/空載組的134.57倍、774.26倍、347.29倍（均 P<0.001），其蛋白48h表達水平也較空白組、空載組明顯增加（P<

4、0.01），空白組與空載組CerS2 mRNA相對表達量、蛋白表達水平均無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；
　　3）MTT法檢測生長曲線發(fā)現(xiàn)：24h、48h實驗組相對空載組、空白組，細胞OD值明顯降低（均P<0.001），空白組與空載組比較細胞OD值無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；
　　4）流式細胞術檢測三組細胞周期，結果提示：空白組與空載組細胞周期時相分布無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；G0/G1期、S期實驗組細胞數(shù)分別為

5、（40.38±3.43）％、（18.83±1.18）%，空載組細胞數(shù)分別為（56.63±1.95）%、（27.28±0.52）%，實驗組較空載組G0/G1期、S期細胞數(shù)下降（均P＜0.01），實驗組G2/M期細胞數(shù)（40.79±4.50）%較空載組（16.09±1.44）%明顯增高（P＜0.001）；
　　5）流式細胞術檢測空載組細胞凋亡率相對空白組無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05），實驗組細胞凋亡率（29.64±0.20）%較空白

6、組（5.70±0.19）%、空載組（6.07±0.17）%明顯增高（均P<0.001）。
　　結論：本研究采用pAdxsi重組腺病毒骨架載體構建pAdxsi-CerS2-GFP人源重組腺病毒表達載體，成功感染甲狀腺癌BCPAP細胞，并分別從mRNA、蛋白層次驗證BCPAP細胞CerS2基因過表達成功。研究結果顯示CerS2基因過表達對BCPAP細胞增殖有抑制作用，其主要機制可能與導致BCPAP細胞G2/M期阻滯，進而誘導細胞凋亡發(fā)