免疫磁珠分離人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的利用免疫磁珠快速分離、純化同質(zhì)性成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。 方法采集正常成人骨髓,經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離出骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)并培養(yǎng)擴(kuò)增,應(yīng)用免疫磁珠從MNCs中分離出Stro-1<'+>細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性方面的測(cè)定與分析,并與傳統(tǒng)貼壁培養(yǎng)法獲得的BMSCs相比較。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)Stro-1<'+>細(xì)胞表面標(biāo)記及細(xì)胞周期分布:通過(guò)相差顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞形態(tài);通過(guò)繪制細(xì)胞貼壁率曲線(xiàn)、生長(zhǎng)曲線(xiàn)、體外擴(kuò)增曲線(xiàn)了解其體外

2、生長(zhǎng)情況及擴(kuò)增能力;通過(guò)誘導(dǎo)成骨后堿性磷酸酶染色、Von Kossa 染色及 X 線(xiàn)衍射分析了解其成骨能力。 結(jié)果利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)。與貼壁法獲得的BMSCs相比較,獲得的細(xì)胞克隆單一,幾乎無(wú)圓形細(xì)胞夾雜,貼壁率高,生長(zhǎng)狀況良好,體外擴(kuò)增可達(dá)10<'6>~10<'7>數(shù)量級(jí)。免疫磁珠分離法對(duì)BMSCs細(xì)胞周期無(wú)明顯影響,其分離所得的BMSCs在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下具有良好的成骨分化能力。

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