SPIO-ShRNA探針體外轉染卵巢癌細胞的最佳濃度及外加磁場對其轉染率的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉染卵巢癌SKOV3細胞的最佳濃度研究
  目的:不同質量濃度的SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉染卵巢癌SKOV3細胞,通過觀察細胞形態(tài)及EGFR表達,尋找分子探針最佳轉染濃度。
  方法:將探針鐵濃度分別為5mg/L、15mg/L、30mg/L、45mg/L、75mg/L、100mg/L轉染SKOV3細胞后,采用熒光顯微鏡觀察探針表達情況,透射電鏡及普魯士藍染色直接觀察

2、細胞形態(tài)改變及細胞內鐵顆粒的分布,應用原子吸收光譜儀法測量細胞內鐵含量,流式細胞術觀察細胞凋亡情況,CCK-8檢測SKOV3細胞活性,western-blot法檢測SKOV3細胞內EGFR蛋白的表達,細胞內T2*WI信號強度的改變應用MR掃描檢測。
  結果:在一定鐵濃度范圍內(5mg/L-30mg/L),細胞內鐵含量隨探針濃度增加而逐漸增大,當探針鐵濃度為45mg/L時,探針進入SKOV3細胞量達到飽和,標記率接近100%,細胞

3、活性下降,細胞存活率減低,細胞內蛋白表達受到抑制(P均<0.01),MR橫斷掃描圖像顯示T2*WI信號強度明顯降低(P<0.01)。
  結論:SPIO-ShRNA分子探針轉染卵巢癌SKOV3細胞時,最優(yōu)轉染濃度為45mg/L,特異性抑制卵巢癌細胞的表達,并能被MR成像所檢測,初步證實具有診斷與特異性治療的雙重功效。
  第二部分外加磁場對SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉染卵巢癌SKOV3細胞的影響
  目的:探討

4、外加磁場對SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉染卵巢癌SKOV3細胞的影響。
  方法:質量濃度為45mg/L分子探針轉染卵巢癌細胞時,并將SKOV3細胞分為3組:未轉染的細胞組(空白對照組), SPIO-ShRNA分子探針轉染的細胞組(陰性對照組),培養(yǎng)皿底部外加磁場的 SPIO-ShRNA分子探針轉染的細胞組(實驗組)。流式細胞儀檢測卵巢癌SKOV3細胞轉染率,CCK-8觀察細胞增殖及活性,熒光定量PCR以及western-b

5、lot分別檢測表皮生長因子受體(EGFR) mRNA及蛋白表達量,磁共振(MR)掃描檢測各組細胞內T2*WI信號強度變化。
  結果:與陰性對照組比較,實驗組的細胞轉染率[(79.20±3.31)%]顯著增加(P=0.001);實驗組的細胞活性( P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表達量均明顯降低(P均<0.01);實驗組的MR圖像信號強度明顯降低( P=0.0004)。
  結論:外加磁場可以誘導 SPIO-ShRN

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