1、Ifl《‘以慢病毒為載體將sox5、6、9和ChondromodulinI基因轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗研究APilotStudyonSOX5，6，9趾dChondromodulinIgenest眥sfecthumallbonemarro、驢derivedmesenchymalstemcellsbylentiVir吣復旦大學2006級外科學七年制臨床型碩士研究生中山醫(yī)院整形外科徐文龍研究生導師：徐劍煒主任醫(yī)師導師組成員：景乃禾研究員楊

2、異鳳助理研究員本課題受國家自然科學基金面上研究項目(編號：30471792)資助2，，Jf0》，●■■中文摘要中文摘要【目的】1分離、擴增和純化人骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)和人軟骨細胞。2構(gòu)建慢病毒載體，將SOX5、6、9和ChondromodulinI基因轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞?！痉椒ā?分離、擴增和純化BMSCs和人軟骨細胞的實驗：從復旦大學附屬中山醫(yī)院骨科接受脊柱或骨盆手術(shù)的2050歲患者(男女不限)廢棄的胸椎、腰椎椎體或髂骨

3、中提取35ml骨髓，經(jīng)密度梯度離心法分離出單個核細胞，通過黏附貼壁篩選及傳代擴增，經(jīng)流式細胞儀鑒定細胞表面相對特異性分子(CD29、CDl05和CDl66)陽性率以明確BMSCs的純度。利用復旦大學附屬耳鼻喉科醫(yī)院2040歲接受鼻中隔軟骨切除手術(shù)的患者(男女不限)廢棄的鼻中隔軟骨分離軟骨細胞、體外培養(yǎng)擴增，分別用常規(guī)培養(yǎng)劑和添加生長因子(TGFB110ng／ml，IGF150n幽_Ill，Dex40n幽：111)進行體外培養(yǎng)、擴增，通過

4、形態(tài)觀察、生長曲線描繪，并經(jīng)免疫熒光、RTPCR方法檢測軟骨特異性標志物，觀察其間的差別。2慢病毒載體構(gòu)建的實驗和慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs實驗：利用已提取的SOX5，6，9基因質(zhì)粒和克隆的ChondromodulinIcDNA，包裝構(gòu)建慢病毒載體，將構(gòu)建好的融合蛋白表達載體轉(zhuǎn)染目的細胞(人BMSCs)，通過熒光顯微鏡觀察融合蛋白GFP、weStemblot、免疫熒光、RTPCR等檢測方法檢測過表達基因的表達情況，以明確轉(zhuǎn)染效果，為進一步研究