1、目的：探討慢病毒介導(dǎo)人凝血IX因子(Human clotting factorIX，hFIX)基因在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cordmesenchymal stem cells，hUCMSCs)中的表達(dá)。
　　 方法：重組構(gòu)建慢病毒載體GV240-hFIX-EGFP，行PCR鑒定和測(cè)序驗(yàn)證。以脂質(zhì)體介導(dǎo)法共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝生產(chǎn)慢病毒，實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定滴度。以不同感染復(fù)數(shù)(multiple of

2、infection，MOI)感染hUCMSCs，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞感染效率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)分三組:實(shí)驗(yàn)組(GV240-hFIX-EGFP感染hUCMSCs)、空載體對(duì)照組(GV240-EGEP感染hUCMSCs)及空白組(空hUCMSCs)，以最適MOI感染hUCMSCs。RT-PCR檢測(cè)hFIX-mRNA水平，ELISA檢測(cè)FIX蛋白含量(FIX∶Ag)及一期法檢測(cè)FIX凝血活性(FIX∶C)。
　　 結(jié)果：制備出了

3、滴度為2×108 TU/mL的重組慢病毒。MOI=10時(shí)能高效感染hUCMSCs，感染效率為(92.92±6.32)％。RT-PCR結(jié)果示只有轉(zhuǎn)染組有hFIX-mRNA轉(zhuǎn)錄。感染后1d，hUCMSCs即可有效分泌hFIX，在5d時(shí)達(dá)到最高峰，F(xiàn)IX∶Ag為(87.18±0.86) ng/(106·24h);FIX∶C為(44.3±3.2)％，這樣高水平分泌可至少持續(xù)29d。
　　 結(jié)論：重組GV240-hFIX-EGFP慢病毒能