1、鯉春病毒血癥病毒(Spring Viremia0fCarp Vh'us,SVCV)屬于彈狀病毒科水泡性病毒屬中的一員,該病毒可引起鯉魚爆發(fā)鯉春病毒血癥(Spring Viremia of Carp,SVC)。囊膜糖蛋白(G)是SVCV最主要的免疫原性蛋白,是疫苗和診斷試劑研制的重要靶蛋白。本研究將連有SVCV G蛋白(SVCV/G)基因的重組轉移質粒pFastBac-SVCV/G轉化進含穿梭載體Bacmid的感受態(tài)細胞DH10Bac中,

2、獲得重組子rBacmid-SVCV/G。在脂質體介導下將該重組子轉染sf9昆蟲細胞,獲得重組桿狀病毒Bac-SVCV/G。結果發(fā)現SVCV/G可介導昆蟲細胞發(fā)生融合,通過間接免疫熒光證明,SVCV/G蛋白表達在昆蟲細胞膜上。前人研究發(fā)現,水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的G蛋白(VSV/G)同樣可以表達在昆蟲細胞膜上并可介導昆蟲細胞融合。為比較SVCV/G與VSV/G介導的細胞融合,以及便于

3、桿狀病毒滴度的測定,本研究構建了三個重組桿狀病毒Bac-SVCV/G-CMV-EGFP、Bac-VSV/G-CMV-EGFP、Bac-CMV-EGFP,并用間接免疫熒光和Western blot檢測了SVCV/G的表達。通過比較SVCV/G與VSV/G介導的昆蟲細胞融合,證實了SVCV/G可介導更加顯著的細胞融合。
　　 桿狀病毒能高效轉導哺乳動物細胞,現已成為一種新型的基因導入載體。本研究利用含有巨細胞病毒極早期基因(Cyto

4、megalovirus immediate-early,CMV-IE)啟動子及其下游增強型綠色熒光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)報告基因的重組桿狀病毒Bac-CMV-EGFP,分別轉導了6種魚類細胞系,并利用流式細胞儀檢測了重組桿狀病毒對魚類細胞系的轉導效率。研究發(fā)現,該重組桿狀病毒可以高效轉導魚類細胞,特別是鯉魚上皮瘤(EPC)細胞和胖頭鯉肌肉(FHM)細胞,轉導效率幾乎為100

5、％,對大馬哈魚胚胎細胞(CHSE-214)細胞的轉導效率較高,其次是草魚腎臟(CIK)細胞和斑點叉尾鮰卵巢(CCO)細胞,對虹鱒性腺(RTG.2)細胞的轉導效率雖不高,但發(fā)現也可以被轉導。同時,本研究還發(fā)現,報告基因在EPC細胞中的表達能夠持續(xù)存在至少80天,說明桿狀病毒轉導EPC細胞后,不僅可以實現外源基因的高效導入,而且還可以使外源基因穩(wěn)定、高量的表達。此外,本研究還發(fā)現以生長培養(yǎng)基作為桿狀病毒孵育液比以PBS作為孵育液能夠更有效的