1、分類號(hào)華 中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文基于 S「 V 復(fù)制子 的重組桿狀病毒 的研 究S tu d yo nT h eR e eo 瓜飯 n a n tB a eu lo v iru sIn eo rP o ra tin g aH y b ridC M VP ro m o torlS F VR eP lico n研 究 生 : 趙 驀指 導(dǎo) 教 師 : 方六榮 教授指 導(dǎo) 小 組 : 肖少波 副教授專業(yè) : 預(yù) 防 獸 醫(yī)學(xué) 研究方 向: 病

2、原分子生物學(xué)與基 因工程獲得學(xué)位名稱 : 農(nóng)學(xué)碩士 獲得學(xué)位 時(shí)間: 2008 年 6 月 10 日華 中農(nóng)業(yè) 大學(xué)動(dòng)物 醫(yī)學(xué) 院二 0 0 八年六 月3. 2. 4 大腸桿 菌感受態(tài)細(xì)胞 的制備(氯化鈣法) ......................................… … Z73. 2.5 連接產(chǎn)物 的轉(zhuǎn)化 .......................................................

3、.........… … 283. 2 . 6 質(zhì)粒的 小量制 備 (改 良的堿裂解法 ) ........................................… … 283. 2.7 質(zhì)粒 的大量制 備 (堿 裂解法 ) ................................................… … 283.2 .8 脂質(zhì) 體 介 導(dǎo)轉(zhuǎn) 化 法 (LipfoctinZ 000 ， ln 訪troge

4、 nC orp .) ................… … 293. 2 . 9 構(gòu)建重組桿狀 病毒的操作流程及示意 圖......................................… … 293. 2 .10 重組穿梭載 體 (Bacm 記) 的構(gòu)建 ...........................................… … 293. 2 .11 重組穿梭載體 (Bacm 記) 的提取 .......

5、....................................… … 303. 2 .12 重組桿狀病 毒獲得 .............................................................… … 313.2.13 重組桿狀病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞 .............................................… … 313. 2 .14 間接 免疫熒 光試

6、驗(yàn) (lFA ) 檢測(cè) 目的蛋 白的體外表達(dá) ......................… … 313.2 .15 重 組 桿狀病 毒介 導(dǎo) 的細(xì) 胞 凋亡檢 測(cè) ..........................................… … 313. 2 .， 6EU SA 方 法 的建立 .............................................................… … 3

7、23.2 .， 7 小 鼠脾 淋 巴細(xì)胞 的分 離 ........................................................… … 333. 2.18 實(shí)時(shí)熒光定量 pC R 檢測(cè)免疫小 鼠脾細(xì)胞 中的 ! 「 N-Y 相對(duì)表水平 ..........… … 333. 2.19 ! 「 N 一 Y 的定量檢測(cè) (雙抗體夾心 EL I SA ) ...........................

8、.........… … 343.2 . 20 統(tǒng) 計(jì) 學(xué)方 法 .....................................................................… … 35J 七 J O 口 b ， J ， ‘ JI J 第 四章 結(jié)果 與分析4 .1 重組桿狀病毒 Bac .CM V /S曰 · EG 印 和 Bac · CM V-EG FP 的構(gòu)建 ..........

9、.........… …4 .1.1 轉(zhuǎn)移載 體 p「 B一 CMV /SFV · EG 印 及 pFB · CM v-〔 G FP 構(gòu)建 .....................… …4 .1. 2 重 組 Bacm 記 的獲得及 鑒 定 ....................................................… … 374 .1.3 重組桿狀病毒 的獲得 ............

10、...............................................… … 384 .， . 4 重組桿狀病毒介 導(dǎo)的外源基 因 EG 「 p 在哺 乳動(dòng)物細(xì)胞 中的表達(dá) ............… … 384 .， .5 轉(zhuǎn) 導(dǎo)條件 對(duì) 外源 基 因表 達(dá) 的影 響 ............................................… … 404 .， .6 由桿狀病毒 引起 的受轉(zhuǎn) 導(dǎo)

11、細(xì)胞 的凋亡 .........................................… … 424 .2V Sv-G 修 飾 的重組桿 狀 病 毒 Bac · G · CM V /S曰 · 〔 G Fp 的構(gòu)建 .....................… … 4 34 . 2 .1V SV-G 修飾 的重組桿狀 病毒載體 的構(gòu)建 ................................

12、......… … 4 34 . 2 .2V SV 一 G 修飾 的重 組桿狀 病 毒 的獲得 ............................................… … 4 34 . 2 .3 重組桿狀病毒 Bac一 G · CM V /S曰 · 〔 G 「 p 在哺乳動(dòng)物細(xì)胞上 的表達(dá) ..........… … 4 34 . 2 . 4V SV-G 修飾 的重組桿狀病毒 Bac一 G 一 C