HBV重組桿狀病毒HepG2系統(tǒng)的建立及初步應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究旨在采用Bac-to-Bac重組桿狀病毒表達系統(tǒng)將復制型HBV基因組轉(zhuǎn)入HepG2細胞，建立HBV中國株及其有關變異株的重組桿狀病毒HepG2細胞系統(tǒng)，并應用該系統(tǒng)初步評價抗病毒藥物拉米夫定對HBV表達及復制的影響。材料和方法：將1.2倍HBV基因組(血清adr型、基因C型)連接至桿狀病毒的轉(zhuǎn)移載體pFastBacI上，然后轉(zhuǎn)化入DH10Bac菌株中，在細菌內(nèi)的Helper質(zhì)粒輔助作用下與桿狀病毒基因組Bacmid發(fā)生位點特異性轉(zhuǎn)

2、座，形成含有HBV基因組的重組Bacmid，轉(zhuǎn)染sf9細胞后，包裝產(chǎn)生HBV重組桿狀病毒vAcHBVc。采用連續(xù)PCR引入方法進行定點突變，構(gòu)建YVDD變異株質(zhì)粒，并按照上述方法構(gòu)建HBV YVDD異株重組桿狀病毒vAcHBVcYVDD。同時，為便于觀察轉(zhuǎn)染效率及病毒滴度測定，將HBV基因組重組入帶有綠色熒光蛋白(eGFP)基因的轉(zhuǎn)移載體pFastBacDualeGFP，從而構(gòu)建得到可在昆蟲細胞中表達綠色熒光蛋白的HBV重組桿狀病毒vA

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