1、草魚出血病是一種發(fā)病率高、致死率高、嚴(yán)重危害當(dāng)年草魚種及二齡草魚的病毒性疾病，其病原為草魚呼腸孤病毒。引發(fā)草魚出血病的因素很多，為了消除或降低該病發(fā)生的可能性或者減少其發(fā)生時(shí)造成的損失，本研究以江西省南昌市及周邊地區(qū)為基點(diǎn)，從該地區(qū)草魚出血病病原的分離與鑒定著手，通過(guò)調(diào)查該地區(qū)草魚出血病流行情況、實(shí)驗(yàn)室模擬試驗(yàn)確定該病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)因素，借助層次分析法明確不同風(fēng)險(xiǎn)因素對(duì)該病發(fā)生的權(quán)重值，即要確定不同風(fēng)險(xiǎn)的優(yōu)先次序或等級(jí)，最后利用綜合評(píng)分法建立

2、該病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)模型。
　　 1.收集江西南昌地區(qū)患典型草魚出血病的病魚組織，進(jìn)行超薄切片電鏡觀察，結(jié)果顯示，在脾、腎樣品中發(fā)現(xiàn)大量病毒顆粒，病毒無(wú)囊膜，近球形，直徑約70nm，形態(tài)與已報(bào)道的草魚呼腸孤病毒(GrassCarpReovirus，GCRV)相似。取病魚肌肉、內(nèi)臟研磨，組織液經(jīng)離心、過(guò)濾除菌后進(jìn)行魚體人工感染試驗(yàn)和細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人工感染試驗(yàn)魚出現(xiàn)死亡，且具有典型出血癥狀；組織濾液感染草魚腎臟細(xì)胞(CIK)后，盲

3、傳六代未觀察到典型細(xì)胞病變效應(yīng)，但感染細(xì)胞固定后經(jīng)超薄切片電鏡觀察，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量病毒存在，與病魚組織切片觀察到的病毒形態(tài)一致。十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結(jié)果進(jìn)一步揭示，新分離病毒株(暫命名JX-0902)基因組由11條dsRNA組成，呈現(xiàn)水生呼腸孤病毒基因組典型特征，但基因組帶型與GCRV873株存在差異，而與HZ08株接近。根據(jù)GenBank上己提交的草魚呼腸孤病毒S6序列(GQ896337)設(shè)計(jì)特異引物

4、，以JX-0902株的cDNA作為模板，可擴(kuò)增出特異性條帶。S6序列聚類分析結(jié)果顯示，JX-0902與GCRVHZ08株、GD108株S6同源性高達(dá)98％、99％，該分離株應(yīng)為草魚呼腸孤病毒。
　　 2.為了確定江西南昌地區(qū)草魚出血病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素，本人采用調(diào)查問(wèn)卷及定點(diǎn)觀測(cè)的方法對(duì)南昌及周邊地區(qū)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
　　 (1)無(wú)論是當(dāng)年草魚種，還是二齡草魚，未免疫池塘發(fā)病率均遠(yuǎn)高于免疫池塘。
　　

5、(2)從時(shí)間分布上看，草魚出血病一般發(fā)生在5月～10月份，早的發(fā)生于四月下旬，晚的會(huì)持續(xù)到11月上旬。從風(fēng)險(xiǎn)主體上看，二齡草魚從5月份開(kāi)始發(fā)生出血病，溫度在25℃左右，集中在6、7月份，30℃以上呈暴發(fā)狀態(tài)；一齡草魚從7月中下旬開(kāi)始發(fā)生，溫度在30℃以上，集中在8、9月份，10月份常與細(xì)菌性爛鰓病并發(fā)。
　　 (3)草魚出血病一般發(fā)生在體長(zhǎng)在7～15cm規(guī)格的草魚上，集中在9～12cm規(guī)格的草魚上。
　　 (4)水體理化

6、因子溶氧、分子態(tài)氮、亞硝酸鹽、透明度、pH等與出血病有密切的關(guān)系。出血病是這些因子綜合作用的結(jié)果。分子態(tài)氮、亞硝酸鹽、溶氧、透明度、pH值等的變化將影響出血病的發(fā)生遲早、病情輕重和流行期長(zhǎng)短。
　　 (5)出血病與池塘使用年限及養(yǎng)殖模式也有關(guān)系。使用年限較長(zhǎng)(如10年)、養(yǎng)殖密度較高、草魚占混養(yǎng)比例較大，高溫季節(jié)投料過(guò)多，患出血病的可能性較大。
　　 3.為了明確一些因素如草魚體長(zhǎng)、溫度、水質(zhì)指標(biāo)等不同水平對(duì)出血病病情的

7、影響，本文設(shè)計(jì)了相應(yīng)的模擬試驗(yàn)，利用最小顯著極差法(LSR法)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，主要試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 (1)草魚呼腸孤病毒JX-0902(組織漿液)感染不同規(guī)格的受試草魚時(shí)，受試草魚的平均病程及死亡率有極顯著差異，病情隨體長(zhǎng)的增加而減輕，按死亡率由高到低排列，依次為(9±0.5)cm、(11±0.7)cm、(13±0.7)cm、(15±0.7)cm。
　　 (2)利用四種形式的毒源：GCRV873細(xì)胞液、HZ08細(xì)胞液

8、、JX-0902細(xì)胞液、JX-0902組織漿液對(duì)體長(zhǎng)(12±1)cm的草魚進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，僅JX-0902組織漿毒試驗(yàn)組出現(xiàn)死亡。
　　 (3)以一定的濃度梯度進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，濃度低的試驗(yàn)組病程較長(zhǎng)，死亡率較低。
　　 (4)用毒株來(lái)源及濃度不同的疫苗免疫試驗(yàn)草魚，以JX-0902組織漿液進(jìn)行人工感染試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)同源性較高的毒株的免疫效果最好，疫苗濃度較低時(shí)，免疫效果較差。
　　 (5)溫度對(duì)受試草魚病情影響達(dá)極顯著水

9、平(P<0.01)，試驗(yàn)組死亡率有高到低依次是(30±1)℃、(34±1)℃、(26±1)℃、(22±1)℃，(18±1)℃。對(duì)照組未出現(xiàn)死亡。
　　 (6)變溫試驗(yàn)證明在一定溫度范圍內(nèi)升高溫度能加劇病情，降低溫度可以緩解病情。
　　 (7)水質(zhì)因子試驗(yàn)證明溶氧水平對(duì)出血病病情影響極顯著；pH對(duì)病程沒(méi)有顯著影響，但對(duì)死亡率有顯著影響，以中性偏酸性水質(zhì)死亡率最高：分子態(tài)氨氮對(duì)出血病病情影響顯著(P<0.05)；亞硝酸鹽對(duì)出

10、血病病情影響不顯著(P>0.05)。
　　 4.本文利用層次分析法(AHP)建立了草魚養(yǎng)殖過(guò)程中出血病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)體系：免疫預(yù)防措施、氣溫、飼料的質(zhì)與量、氣溫變化、魚種規(guī)格、溶氧、池塘深度、分子態(tài)氨氮、亞硝酸鹽、酸堿度、透明度。根據(jù)文獻(xiàn)信息、調(diào)查資料，模擬試驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)風(fēng)險(xiǎn)因子不同水平進(jìn)行賦值并確定了各指標(biāo)相對(duì)于出血病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的權(quán)重：0.425、0.216、0.113、0.072、0.049、0.044、0.036、0.020、0