1、目的：骨性關節(jié)炎是骨科領域最常見的關節(jié)病變，隨著我國老齡化進程的發(fā)展，OA的發(fā)病率會不斷升高，嚴重影響了中老年人的生活質量。骨性關節(jié)炎的主要病理學變化為關節(jié)軟骨不同程度退行性變性或消失，以及軟骨下骨質破壞。病理研究證實，關節(jié)軟骨軟骨變性是骨性關節(jié)炎特征性病理改變，也是OA最根基的病理改變。有關軟骨退變機制及其細胞和分子基礎成為近年來研究的熱點。本課題利用徐長卿丹皮酚對基質金屬蛋白酶的影響作為切入點，從細胞形態(tài)、電鏡下超微病理結構的改變、

2、分子生物學三個層面探討徐長卿丹皮酚治療骨性關節(jié)炎的作用機理，為臨床推廣徐長卿丹皮酚治療骨性關節(jié)炎提供理論和實驗依據。
　　 方法：40只體重2kg(±100g)健康新西蘭成年大耳白兔，雌雄不限，隨機分為正常組、對照組、生理鹽水組、曲安奈德組、徐長卿丹皮酚組，每組8只。隨機選取8只作為正常組，其余32只采用兔膝關節(jié)內側半月板前1/3切除及前交叉韌帶切斷(ACLT)制備骨關節(jié)炎(OA)模型方法[4]進行造模，4周后造模成功。正常組:

3、不作任何治療。對照組:僅采用兔膝關節(jié)內側半月板前1/3切除及前交叉韌帶切斷(ACLT)制備骨關節(jié)炎(OA)模型方法進行造模，不予其它處理。生理鹽水組、曲安奈德組、徐長卿丹皮酚組:造模術后第1周開始各組分別予以右膝關節(jié)內注射0.9％生理鹽水、曲安奈德、徐長卿丹皮酚各0.2ml，2次/周，共10次，給藥5周。各組動物分別于完成5周用藥療程后，耳緣靜脈緩慢注入適量空氣處死，暴露膝關節(jié)腔。①關節(jié)軟骨肉眼觀察表面光滑度、色澤、表面糜爛程度、是否有

4、纖維性增生及軟骨下骨暴露等形態(tài)學改變，拍照并按大體評分標準評分;取制備好的股骨內側髁關節(jié)軟骨標本，透射式電子顯微鏡下進行超微結構觀察并拍照。②取右側股骨內側髁關節(jié)面約2mm厚關節(jié)軟骨標本制作成石蠟切片后，兩步法免疫組化染色，置光鏡下對其組織結構進行詳細的觀察，并參照Mankin關節(jié)軟骨病理評分標準進行積分統(tǒng)計Mankin評分，包括關節(jié)軟骨結構，細胞數的變化，潮線的完整性及易染性四個方面;統(tǒng)計學分析關節(jié)軟骨基質金屬蛋白酶（MMP-1）和其

5、抑制劑（TIMP-1）表達的陽性指數。③采用RNA原位雜交方法利用MMP-1和TIMP-1寡核苷酸探針，對兔關節(jié)軟骨MMP-1和TIMP-1 mRNA作定位和定量分析，檢測兔膝關節(jié)骨性關節(jié)炎軟骨組織MMP-1和TIMP-1 mRNA表達。
　　 結果：
　　 1.大體觀察示正常組關節(jié)面光滑完整。對照組軟骨改變集中在股骨內側髁關節(jié)面，關節(jié)軟骨有蟲蝕樣改變和軟骨剝脫缺損。生理鹽水組軟骨表面粗糙，肥厚。徐長卿丹皮酚組關節(jié)面略粗

6、糙，軟骨輕度糜爛。曲安奈德組軟骨糜爛程度較徐長卿組重，有的可見軟骨下骨暴露。電鏡觀察示正常組細胞形態(tài)正常，胞核完整，胞漿密度均勻，可見大量細胞器，細胞表面的絨毛和膠原清晰可見。對照組大多數軟骨細胞形態(tài)不規(guī)則，胞質內細胞器溶解，膠原排列紊亂。生理鹽水組大部分軟骨細胞腫脹明顯。徐長卿組:細胞形態(tài)尚存，膠原輕度紊亂，胞質內粗面內質網豐富。曲安奈德組:呈顆粒狀外觀，細胞質內部分細胞器溶解，膠原纖維含量較少。
　　 2.組織學觀察示正常組

7、Mankin評分0-1分;徐長卿丹皮酚組以輕度至中度損傷為主，Mankin評分4-6分;曲安奈德組以中等軟骨損傷為主，Mankin評分8-10分;造模組以重度軟骨損傷為主，Mankin評分11-12分;生理鹽水組與造模組相似。徐長卿丹皮酚組軟骨組織MMP-1表達的陽性指數較正常組增高，較曲安奈德組和造模組低，組間比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);徐長卿丹皮酚組軟骨組織TIMP-1表達水平較曲安奈德組增高，兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜

8、0.05)，曲安奈德組TIMP-1表達水平與造模組、生理鹽水組組間比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 3.正常組關節(jié)軟骨MMP-1和TIMP-1 mRNA表達均低下或無表達;徐長卿丹皮酚組軟骨組織MMP-1和TIMP-1mRNA表達均較低;曲安奈德組軟骨組織MMP-1mRNA表達明顯增強;造模組關節(jié)軟骨MMP-1mRNA表達最強，TIMP-1mRNA全層無表達或低下;徐長卿丹皮酚組軟骨組織MMP-1mRNA表達水平較正常組

9、增高，較曲安奈德組和造模組低，組間比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);徐長卿丹皮酚組軟骨組織TIMP-1 mRNA表達水平較曲安奈德組增高，兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：實驗結果提示關節(jié)損傷程度與MMP-1的表達成正相關，徐長卿丹皮酚可能具有抑制MMP-1的表達，消除MMP-1對軟骨細胞外基質過度降解的作用。與此同時，MMP-1的特異性抑制物TIMP-1雖然隨著MMP-1分泌的升高也有所升高，但與MMP