1、我們在對一個細胞因子類似因子-CKLF的研究過程中,發(fā)現(xiàn)在其染色體區(qū)域附近約10 Mb處存在一個新的蛋白質編碼基因.對這個基因進行生物信息學分析,沒有得到有關趨化因子的提示,這個基因的結構分析表明從4-135氨基酸為一個DIM1結構域,因此我們將這個基因編碼的蛋白稱為DIM1-like Protein(DLP).氨基酸序列進行同源性分析發(fā)現(xiàn)DLP與酵母的一個15 KD的剪接體蛋白U5有弱的同源性,和一種有絲分裂蛋白DIM1及人硫氧還蛋白

2、分別有39%、24%的同源性,同時發(fā)現(xiàn)它在人、鼠、Arabidopsis thaliana、Oryza、melanogaster、果蠅、酵母菌等各種屬之間有相當的保守性.DLP的序列與Golemis命名的DIM2相同(Zhang et al.1999).因此,我們推測DLP也許是DIM1家族的成員之一.向GenBank提交登記獲得接受,GenBank的登記號為AY566808.DIM1屬近幾年發(fā)現(xiàn)的一個硫氧還原蛋白超家族的第六分支.在人

3、和酵母中,DIM1蛋白是U4/U6和U5 tri-snRNP的一個亞基,其突變能使細胞停滯在G2/M期并且影響Pre-mRNA剪接過程.考慮到DIM1蛋白可能是通過影響Pre-mRNA的剪接來間接影響細胞周期,所以我們設想DLP也可能參與Pre-mRNA剪接的過程.我們首先對DLP進行表達譜分析,Nothem Blot顯示DLP在骨骼肌、肝臟、心臟和胰腺中高表達,在腎臟,腦和胎盤中中等程度的表達,在肺中表達較低.RT-PCR證實DLP在

4、人的乳腺癌細胞MCF-7,肝癌細胞HepG2和子宮內膜癌細胞Ishikawa中也有高表達.說明DLP在體內多個組織均有表達但又有特異性.用綠色熒光蛋白做定位表明DLP定位于核內,推測DLP可能在剪接和轉錄過程中發(fā)揮作用.在原核細胞中表達了DLP,并免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體.利用制備的多克隆抗體進行Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)DLP在MCF-7細胞中有內源性表達.用GST Pull-down實驗篩選DLP相互作用的蛋白質,發(fā)現(xiàn)D

5、LP與剪接相關因子Prp6(U5-102 KD)在體外存在直接的相互作用.缺失體研究證實DLPN端的33個氨基酸是與Prp6相互作用的區(qū)域.免疫共沉淀實驗和酵母雙雜實驗以及共聚焦進一步證明DLP和Prp6的確存在相互作用.體外剪接實驗證實DLP能促進剪接底物Adml-M3 Pre-mRNA的剪接.我們的研究結果表明DLP可能是一個新的參與Pre-mRNA剪接和細胞周期調控的蛋白因子.DLP的發(fā)現(xiàn)不僅提供了一個發(fā)現(xiàn)新的功能基因的實例,而且